Ein ATP-Verwertungsassay zur Bestimmung des bakteriellen Überlebens unter Antibiotikabehandlung
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Immunologie
0 Aufrufe • 2:56 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit der Aussaat einer Bakterienkultur in eine Assay-Platte. Inkubieren Sie dann die Platte.
Die Bakterienzellen haben Oberflächenadhäsine und Pili, die es ihnen ermöglichen, aneinander zu haften und kleine Aggregate zu bilden.
Geben Sie unterschiedliche Antibiotikakonzentrationen in die Vertiefungen, so dass eines für eine Kontrolle unbehandelt bleibt.
Die antibiotischen Moleküle interagieren mit empfindlichen Bakterien, beeinträchtigen deren Fähigkeit zu wachsen und sich zu vermehren, was zu ihrem Tod führt.
Die antibiotikaresistenten Bakterien bleiben metabolisch aktiv und produzieren ATP-Moleküle.
Verwenden Sie einen Ultraschallgerät, um die Bakterienzellen zu zerstören und ihren intrazellulären Inhalt, einschließlich ATP, freizusetzen.
Fügen Sie ein ATP-Verwertungs-Glühreagenz hinzu, das Luciferin, Luciferase-Enzym und andere Co-Faktoren enthält.
Luciferase nutzt ATP und Sauerstoff, um Luciferin in ein angeregtes Oxyluciferin umzuwandeln.
Das Oxyluciferin geht anschließend in seinen Grundzustand über und emittiert lumineszierendes Licht.
Messen Sie die Extinktion mit einem Plattenlesegerät.
Die Abnahme der Absorption bei höheren Antibiotikakonzentrationen deutet au
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