Ein Assay zur Bewertung der Immundominanz in zytotoxischen T-Lymphozyten-Antworten

Beginnen Sie mit fluoreszierenden Farbstoff-markierten Zielzellen, die ein nicht-reaktives Peptidepitop oder Tumorantigen-abgeleitete Peptidepitopen mit unterschiedlicher Immunogenität aufweisen.

Diese Zellen weisen unterschiedliche Fluoreszenzintensitäten auf – niedrig, intermediär und hoch – entsprechend der Präsentation von nicht-reaktiven, subdominanten bzw. immundominanten Peptidepitopen.

Verabreichen Sie die Zellsuspension intravenös an eine sensibilisierte Maus.

Die injizierten Zellen wandern in die Milz, die Immunzellpopulationen enthält, einschließlich zytotoxischer T-Lymphozyten oder CTLs.

Innerhalb der Milz interagieren CTLs mit den Epitopen der Zielzellen.

Immundominante Epitope, die immunogener sind, lösen eine robuste CTL-Immunantwort aus, die zytotoxische Substanzen freisetzt und zu einer hochintensiven Fluoreszenzzelllyse führt.

Sammle die Milz der Maus ein und zerstöre sie mechanisch. Fügen Sie einen Lysepuffer hinzu, um rote Blutkörperchen zu eliminieren und die Suspension zu filtern.

Zentrifugieren Sie das Küvettenpellet und resuspendieren Sie es.

Sortieren Sie die Zellen mit einem fluoreszenzaktivierten Zellsortierer. Die Reduktion von hochintensiven Fluoreszenz