JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 2:50 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multiwell-Platte, die pathogene Darmbakterien in einem Wachstumsmedium enthält.
Das Medium in den ausgewählten Vertiefungen enthält Gallensalze – oder amphipathische Moleküle mit waschmittelähnlicher Aktivität – die raue Wachstumsbedingungen nachahmen.
Gallensalze stören die Bakterienmembran und schädigen DNA und Proteine.
Als Gegenmechanismus bilden die Bakterien einen Biofilm – eine strukturierte Bakteriengemeinschaft, die von einer selbst produzierten Matrix aus extrazellulären polymeren Substanzen (EPS) umhüllt ist, die Polysaccharide, Proteine, Lipide und Nukleinsäuren mikrobiellen Ursprungs enthält.
Die EPS-Schicht schützt die Bakterien vor dem Kontakt mit den Gallensalzen.
Nach der Inkubation das Medium ansaugen, um frei schwebende Bakterien zu entfernen.
Mit einem Fixierungspuffer behandeln, um die Architektur des Biofilms zu erhalten, und waschen, um überschüssigen Puffer zu entfernen.
Fügen Sie fluoreszenzmarkiertes Concanavalin A hinzu – ein Lektin, das an EPS-Polysaccharide bindet und den Biofilm markiert. Waschen, um überschüssiges Concanavalin A zu entfernen.
Messen Sie mit einem Plattenleser die Fluoreszenz. Eine höhere Fluoreszenzintensität in den Ga
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