Messung der Aktivierung von Fc-vermittelten Effektorfunktionen durch HA-Antikörper

Nehmen wir serielle Verdünnungen eines Antikörpers, der auf das Influenzavirus-Hämagglutinin (HA) abzielt, ein Glykoprotein, das aus einem kugelförmigen Kopf und einem Stiel besteht.

Geben Sie die Verdünnungen auf transfizierte Säugetierzellen, die oberflächengebundenes HA exprimieren. Die Antikörper binden an die HA-Stielregionen und bilden Immunkomplexe.

Einführung von gentechnisch veränderten T-Zellen, die Fc-Rezeptoren exprimieren und einen Luciferase-Reporter unter der Kontrolle des Transkriptionsfaktors NFAT kodieren.

Während der Inkubation bindet der HA-gebundene Antikörper an den Fc-Rezeptor, während der HA-Kopf an Sialinsäure bindet, was die Aktivierung der T-Zellen auslöst und die zytosolische Kalziumkonzentration erhöht.

Diese Aktivierung initiiert eine Signalkaskade, die zur Dephosphorylierung von NFAT führt und seine nukleare Translokation auslöst.

NFAT bindet an seine Reaktionselemente im Genom und treibt die Luciferase-Expression voran.

Fügen Sie ein zellpermeables biolumineszierendes Substrat hinzu. Luciferase oxidiert das Substrat und erzeugt ein Signal.

Eine verminderte Lumineszenz mit abnehmender Antikörperkonzentration bestätigt die HA-Stiel-spezifische Antikörp