JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:51 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Maus, die mit einer Metallopeptidase immunisiert wurde. Ernten Sie die Milz und erhalten Sie eine Zellsuspension.
Filtern Sie die Suspension durch ein Netz und eine Zentrifuge, um Gewebeablagerungen zu entfernen.
Zu den isolierten Zellen gehören Metallopeptidase-spezifische B-Zellen, die Antikörper gegen Metallopeptidase-Epitope produzieren.
Fügen Sie unsterbliche Myelomzellen hinzu, denen das HGPRT-Enzym fehlt, um die Rettung von Nukleobasen für die Nukleotidsynthese zu verhindern. Sie überleben über die de novo Nukleotidsynthese.
Zentrifugieren, um ein Pellet zu erhalten, und den Überstand verwerfen.
Fügen Sie PEG hinzu und inkubieren Sie, wodurch eine Myelom-B-Zellfusion induziert wird, um HGPRT-positive immortale Hybridome zu bilden.
Fügen Sie HAT-Medium hinzu, das Hypoxanthin, Aminopterin und Thymidin enthält. In Vertiefungen mit einer peritonealen Makrophagen-Feeder-Schicht überführen, die das Hybridomwachstum fördert.
Aminopterin blockiert die De-novo-Nukleotidsynthese, wodurch nicht fusionierte Myelomzellen absterben. Nicht fusionierte B-Zellen sterben aufgrund ihrer kurzen Lebensdauer ab.
Die HGPRT-positiven Hybridome retten die Nukleotidvorläufer Hypoxanth
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos