Ein Verfahren zur Herstellung rekombinanter Antikörper gegen Metallopeptidase

Beginnen Sie mit einem Röhrchen mit einem kationischen Transfektionsmittel auf Lipidbasis und fügen Sie rekombinante Expressionsplasmide hinzu.

Das Plasmid trägt unter einem Promotor ein Gen, das für rekombinante Antikörper kodiert, die auf Metallopeptidase abzielen, und grün fluoreszierendes Protein (GFP), während sich das Antibiotikaresistenzgen unter einem anderen Promotor befindet.

Positiv geladene Lipide interagieren mit einem negativ geladenen Plasmid und bilden einen Komplex.

Übertragen Sie die Komplexe in eine Multi-Well-Platte mit Säugetierzellen, so dass das Plasmid in das Zytoplasma gelangen kann.

Das Plasmid gelangt in den Zellkern und wird in mRNAs für Antibiotikaresistenzproteine und bicistronische mRNAs transkribiert, die für rekombinante Antikörper und GFPs kodieren.

Diese mRNAs führen zur Produktion von rekombinanten Antikörpern, GFPs und Antibiotikaresistenzproteinen.

Ersetzen Sie das Medium nach der Transfektion durch ein mit Serum angereichertes Medium.

Führen Sie ein Antibiotikum ein und eliminieren Sie selektiv nicht transfizierte Zellen, während die antibiotikaresistenten transfizierten Zellen überleben.

Sammeln Sie mit der fluoreszenzaktivierten Zellsortiert