Ein in vitro künstlicher Aktivierungsassay zur Untersuchung der Fc-Rezeptoraktivierung durch Antikörper

Nehmen Sie eine Suspension von natürlichen Killerzellen oder NK-Zellen.

Monoklonale Anti-CD20-Antikörper hinzufügen und inkubieren.

In Abwesenheit von Zielkrebszellen, die das CD20-Antigen exprimieren, bindet die Fc-Region der Antikörper an die FcγRIIIa-Rezeptoren auf der NK-Zelloberfläche.

Nach der Inkubation gekühlte Medien hinzufügen. Zentrifugieren und ungebundene Antikörper entfernen.

Fügen Sie als Nächstes anti-humane κ-Leichtketten-Antikörper hinzu. Ausbrüten.

Diese Sekundärantikörper binden an die κ-Leichtkette der monoklonalen Antikörper.

Die Antikörpervernetzung ahmt die Bindung an das Zielantigen nach und löst eine intrazelluläre Signalkaskade aus.

Dies bewirkt eine künstliche Stimulation von NK-Zellen in Abwesenheit von Krebszellen.

Aktivierte NK-Zellen durchlaufen eine Umlagerung des Zytoskeletts und setzen zytotoxische Granulate frei.

Darüber hinaus produzieren die Zellen Chemokine und Zytokine.

Fügen Sie nach der gewünschten Dauer gekühlte Medien hinzu, um die Zellstimulation zu stoppen.

Zentrifugieren Sie das Röhrchen. Sammeln Sie den Überstand und das Zellpellet für die nachgelagerte Analyse der Antikörper-vermittelten Effektor-NK-Zellfunktionen.

Geben

Sie 100 Mikr