Konvektionsverstärkte Verabreichung von Antikörpern in ein Mäusegehirn

Befestigen Sie eine anästhesierte Maus mit einem kranialen Mittellinienschnitt an einem stereotaktischen Rahmen.

Erkennen Sie das Bregma, einen Referenzpunkt am Schädel, und bestimmen Sie die Injektionsstelle.

Schaffen Sie ein Bohrloch an der Stelle, um eine Beschädigung der Dura mater, die das Gehirn bedeckt, zu vermeiden.

Nehmen Sie einen mit Antikörpern beladenen Stufenkatheter, der auf einem stereotaktischen Roboter montiert und mit einer Infusionspumpe verbunden ist.

Der Katheter besteht aus einer Quarzglaskapillare, die aus einer Metallnadel herausragt und einen abgestuften Außendurchmesser am Schmelzpunkt erzeugt.

Führen Sie den Katheter in das Hirnparenchym ein. Starten Sie die Infusionspumpe, um einen Druckgradienten an der Katheteröffnung zu erzeugen, und geben Sie die Antikörper mit einer kontrollierten Geschwindigkeit ab, eine Technik, die als konvektionsverstärkte Verabreichung bekannt ist.

Durch den abgestuften Durchmesser wird das Gewebe zusammengedrückt und es entsteht eine Abdichtung.

Die Dichtung verhindert den Rückfluss von Flüssigkeiten und ermöglicht die Verteilung großer Antikörpervolumina bei gleichzeitiger Verringerung des Risikos von Gewebeschäden.

Für die Antikörperinjektion in das Mausstriatum bestätigen Sie, dass bei einer anästhesierten Maus keine Reaktion auf Hautkneifen vorliegt, und rasieren Sie den Kopf mit einem Haarschneider. Desinfizieren Sie die Haut mit Wattestäbchen, die in Jodlösung getränkt sind.

Verwenden Sie ein Skalpell, um einen 10 Millimeter großen Hautschnitt entlang der kranialen Mittellinie zu machen, der auf Augenhöhe endet. Fixieren Sie die Maus mit der Nasenklemme und den Ohrbügeln im stereotaktischen Rahmen und achten Sie darauf, dass die Schädeloberfläche horizontal und fest befestigt ist.

Platzieren Sie die Spritze in den stereotaktischen Roboter und synchronisieren Sie den Bohrer mit der Spitze des Katheters auf einem Referenzpunkt. Verwenden Sie eine Pinzette, um die Haut zurückzuziehen und Bregma auf der Schädeloberfläche zu lokalisieren. Referenzieren Sie das Bregma in der Software mit der Spitze des Bohrers und bewegen Sie den Bohrer aus der Bregma-Position auf einen 1-Millimeter-Frontal- und einen 2-Millimeter-Winkel zur Seite.

Bohren Sie ein Bohrloch, achten Sie darauf, die Dura Mater nicht zu beschädigen, und bewegen Sie die Spritze über das Bohrloch. Geben Sie 0,5 bis 1 Mikroliter aus der Spritze ab, um sicherzustellen, dass keine Luftblasen im Katheter zurückbleiben. Beginnen Sie die konvektionsverstärkte Verabreichung wie gezeigt und beobachten Sie die Schädeloberfläche auf Spuren von Flüssigkeitsrückfluss von der Injektionsstelle.

Starten Sie die Injektionspumpe am Ende der Verabreichung und der Katheterentfernung mit 0,2 Mikrolitern pro Minute, um während der Injektion nach Anzeichen von Katheterverstopfungen zu suchen. Wenn keine Verstopfung aufgetreten ist, sollte sofort ein Tröpfchen der Injektionsmischung beobachtet werden, das aus der Katheterspitze austritt.