Eine Technik zur Aufreinigung monoklonaler Antikörper, die von Ovarialzellen des chinesischen Hamsters produziert werden

Nehmen Sie eine FPLC-Säule, die ein poröses Glasharz mit immobilisiertem Protein A enthält – einem Antikörper-bindenden bakteriellen Protein. Äquilibrieren Sie die Säule mit einem Puffer mit neutralem pH-Wert.

Fügen Sie Zellkulturflüssigkeit hinzu, die aus Eierstockzellen des chinesischen Hamsters gewonnen wurde und monoklonale Antikörper sowie kontaminierende Proteine und DNA enthält.

Protein A bindet an die Fc-Region des Antikörpers und immobilisiert sie.

Einige Verunreinigungen lagern sich unspezifisch an das Harz an, während der Rest durchfließt.

Im Chromatogramm deutet eine erhöhte UV-Absorption während der Probenbeladung auf eine hohe Proteinkonzentration im Durchfluss hin.

Mit dem Äquilibrierungspuffer waschen, um ungebundene Verunreinigungen zu entfernen, was sich in einer Abnahme der Absorption zeigt.

Spülen Sie mit einem Puffer mit hohem Salzgehalt, um die unspezifischen Wechselwirkungen zu unterbrechen und die Verunreinigungen zu entfernen, was durch einen kleinen Verunreinigungspeak angezeigt wird.

Fügen Sie einen Elutionspuffer mit niedrigem pH-Wert hinzu, um die Protein-A-Antikörper-Interaktion zu unterbrechen, und eluieren Sie die Antikörper, die durch Verfolgung des