Eine Technik zur Aufreinigung monoklonaler Antikörper, die von Ovarialzellen des chinesischen Hamsters produziert werden

Nehmen Sie eine FPLC-Säule, die ein poröses Glasharz mit immobilisiertem Protein A enthält – einem Antikörper-bindenden bakteriellen Protein. Äquilibrieren Sie die Säule mit einem Puffer mit neutralem pH-Wert.

Fügen Sie Zellkulturflüssigkeit hinzu, die aus Eierstockzellen des chinesischen Hamsters gewonnen wurde und monoklonale Antikörper sowie kontaminierende Proteine und DNA enthält.

Protein A bindet an die Fc-Region des Antikörpers und immobilisiert sie.

Einige Verunreinigungen lagern sich unspezifisch an das Harz an, während der Rest durchfließt.

Im Chromatogramm deutet eine erhöhte UV-Absorption während der Probenbeladung auf eine hohe Proteinkonzentration im Durchfluss hin.

Mit dem Äquilibrierungspuffer waschen, um ungebundene Verunreinigungen zu entfernen, was sich in einer Abnahme der Absorption zeigt.

Spülen Sie mit einem Puffer mit hohem Salzgehalt, um die unspezifischen Wechselwirkungen zu unterbrechen und die Verunreinigungen zu entfernen, was durch einen kleinen Verunreinigungspeak angezeigt wird.

Fügen Sie einen Elutionspuffer mit niedrigem pH-Wert hinzu, um die Protein-A-Antikörper-Interaktion zu unterbrechen, und eluieren Sie die Antikörper, die durch Verfolgung des entsprechenden Peaks gesammelt werden.

Neutralisieren Sie den pH-Wert der gesammelten Antikörper, um einen Abbau zu verhindern.

Öffnen Sie zunächst die an das Aufreinigungssystem angeschlossene Software und platzieren Sie konische 15-Milliliter-Röhrchen, um das gereinigte Antikörper-Eluat aufzufangen, und konische 50-Milliliter-Röhrchen, um den Durchfluss während der salzreichen Reinigung in den Fraktionssammler zu sammeln.

Geben Sie anschließend 0,22 Mikrometer porengefilterte geerntete Zellkulturflüssigkeit in eine leere 12-Milliliter-Spritze mit einer verschlossenen Düse. Führen Sie nach dem Entfernen der Kappe die Spritzendüse in die manuelle Injektionsöffnung des Reinigungssystems ein. Drehen Sie die Spritze, um sie festzuziehen, und drücken Sie den Kolben, bis das gesamte Volumen der Probe injiziert wurde und in der beigefügten 10-Milliliter-Probenschlaufe mit großem Volumen sichtbar ist.

Wählen Sie die gespeicherte Methode aus und klicken Sie auf Ausführen, wenn Sie von der Gerätesoftware dazu aufgefordert werden. Wenn alle Antikörper eluiert wurden, neutralisieren Sie das gereinigte Protein sofort mit 1 molaren Trisbase auf einen pH-Wert von etwa 5,5.