Ein Assay zum Nachweis von Autoantikörpern in humanem Serum unter Verwendung einer neuronalen Kultur aus dem Hippocampus

Nehmen wir den Rattenembryo hippocampi.

Fügen Sie Trypsin hinzu. Inkubieren, um den Abbau der Gewebematrix zu vermitteln und die Hippocampuszellen zu lockern.

Mit einem Puffer verdünnen. Inkubieren Sie für eine fortgesetzte enzymatische Verdauung mit Trypsin.

Übertragen Sie anschließend die Gewebemasse in ein mediumhaltiges Röhrchen. Wiederholtes Pipettieren zur mechanischen Dissoziation in einzelne Zellen.

Samenzellen auf Poly-L-Lysin-beschichteten Deckgläsern in Kulturplatten.

ausbrüten. Hippocampuszellen haften an den beschichteten Oberflächen. Die Neuronen entwickeln eine Lamelle und verlängern kleinere Neuriten.

Darüber hinaus wachsen die Neuriten mit axonalen und dendritischen Prozessen und bilden ein neuronales Netzwerk.

Reife Neuronen exprimieren synaptische exzitatorische Rezeptoren, N-Methyl-D-Aspartat-Rezeptoren oder NMDARs.

Waschen Sie die Deckgläser nach der Inkubation mit Medien.

Fügen Sie ein verdünntes Serum für Patienten mit Autoimmunenzephalitis hinzu. Die Autoantikörper binden an neuronale NMDARs.

Mit Puffer waschen und dann die Zellen fixieren.

Fügen Sie fluorophormarkierte Sekundärantikörper hinzu, die an die NMDAR-gebundenen Autoantikörper binden.

Mit Puffer w