JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 Ansichten • 2:39 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie Prostatakrebszellen und injizieren Sie sie subkutan in eine anästhesierte, immungeschwächte Nacktmaus.
Das Fehlen einer Immunantwort ermöglicht es den injizierten Zellen, zu überleben und sich zu vermehren und einen Tumor zu bilden.
Die Tumorzellen überexprimieren ein prostataspezifisches Membranantigen (PSMA), ein Protein der Zelloberfläche.
Nehmen Sie PSMA-spezifische Antikörper, die an einen Radiotracer konjugiert sind, und injizieren Sie sie intravenös in den Schwanz der tumortragenden Maus.
Antikörper gelangen zu den Tumorzellen und binden an PSMA, wodurch der Tumor markiert wird.
Legen Sie die anästhesierte Maus in einen Positronen-Emissions-Tomographen oder PET-Scanner und machen Sie einen Scan.
Das erstellte Bild zeigt die Verteilung des Radiotracers und hebt Bereiche mit hoher Antikörperaufnahme hervor, die der Tumorlokalisation entsprechen.
Bei männlichen athymischen Nacktmäusen implantiert man subkutan 5 x 106 LNCaP-Prostatakrebszellen, so dass diese zu einem 100 bis 150 Millimeter großen Xenotransplantat heranwachsen können. Drei bis vier Wochen nach der Impfung sollten die Tumore bereit sein.
Für die Bildgebung verdünnen Sie das Radioimmunkonjugat 89Zr-DFO-J591 auf eine Konzentration von 1 Millicurie pro Milliliter in 0,9 % steriler Kochsalzlösung. Als nächstes injizieren Sie 200 Mikroliter der Lösung 89Zr-DFO-J591 in die laterale Schwanzvene der Xenotransplantat-tragenden Mäuse.
Betäuben Sie die Maus zum gewünschten Zeitpunkt der Bildgebung mit einem 2%igen Isofluran-Sauerstoff-Gasgemisch. Platzieren Sie die Maus auf einem PET-Scannerbett für kleine Tiere. Überprüfen Sie die Anästhesie mit der Zehenkneifmethode und tragen Sie Veterinärsalbe auf die Augen der Maus auf, um ein Austrocknen während der Anästhesie zu verhindern.
Halten Sie die Anästhesie während des Scans mit einem 1%igen Isofluran-Sauerstoff-Gasgemisch aufrecht. Anschließend erfassen Sie die PET-Daten für die Maus per statischem Scan mit mindestens 40 Millionen koinzidenten Ereignissen unter Verwendung eines Energiefensters von 350 bis 700 Kiloelektronenvolt und eines Koinzidenzzeitfensters von sechs Nanosekunden.