Eine doppelt markierte Immunfluoreszenztechnik zur Visualisierung von Wirts- und Krankheitserregerproteinen in einer infizierten Zelle

Beginnen Sie mit fixierten und permeabilisierten Epithelzellen, die mit einem pathogenen Parasiten infiziert sind.

Fügen Sie einen Blockierungspuffer hinzu, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.

Overlay mit polyklonalen Primärantikörpern der Maus, die spezifisch mit den Proteinen des Parasiten interagieren.

Fügen Sie dunkelrote Fluorophor-markierte Sekundärantikörper hinzu, die mit parasitären proteingebundenen Primärantikörpern interagieren.

Waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen. Blockieren Sie mit Anti-Maus-Antikörpern, die an Primärantikörper binden und so die Kreuzreaktivität während der Wirtsproteinmarkierung minimieren.

Monoklonale Primärantikörper der Maus hinzufügen, die auf Ribonukleoproteine des Wirts in Epithelzellen abzielen.

Overlay mit einer Mischung aus grün fluorophor-markierten Sekundärantikörpern und rotem Fluorophor-konjugiertem Phalloidin, um die Markierung von Wirtsprotein-gebundenen Primärantikörpern bzw. Aktin zu erleichtern.

Mit einem Puffer waschen. Mit einem DNA-Flecken-haltigen Medium montieren, das dem Wirtskern, dem Parasitenkern und dem Kinetoplasten eine blaue Färbung verleiht.

Analysieren Sie die Proben mit einem konfokalen