Antikörperproduktion aus einer Batch-Überwucherungskultur von transfizierten Säugetierzellen

Beginnen Sie mit einem Kolben mit stabil transfizierten Säugetierzellen in einem serumfreien Medium, das mit einem nichtionischen Tensid ergänzt wird, um eine Zellaggregation zu verhindern.

Diese Zellen tragen ein modifiziertes Genom, das integrierte Schwer- und Leichtkettengene für die therapeutische Antikörperproduktion enthält.

Stellen Sie Trypton vor, eine nährstoffreiche Quelle für Peptide und Aminosäuren, die für den Zellstoffwechsel unerlässlich sind.

Die Zelle nutzt diese Aminosäuren und Peptide und vermehrt sich, was zu einem Überwachsen führt, das eine höhere Antikörperausbeute unterstützt.

Die Expression von Genen in den Zellen treibt die Produktion von schwer- und leichtkettigen Polypeptiden voran.

Im endoplasmatischen Retikulum falten und dimerisieren sich diese Ketten über Disulfidbindungen zwischen den Ketten und bilden therapeutische Antikörper.

Im Golgi-Apparat werden Antikörper posttranslational modifiziert. Anschließend werden sie in Vesikel verpackt und in das Medium abgegeben.

Inkubieren Sie die Zellen für eine längere Zeit, um die Antikörperproduktion zu erhöhen.

Wenn die Lebensfähigkeit der Zellen abnimmt, ernten Sie den Überstand.

Filtern Sie den Überstand mit therapeutischen Antikörpern und lagern Sie ihn für die spätere Verwendung bei einer niedrigeren Temperatur.

Samenzellen in einer Menge von 2 x 10⁵ Zellen pro Milliliter in 100 Millilitern serumfreiem Medium in zwei Kolben. Inkubieren Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid bei 120 Umdrehungen pro Minute für 24 Stunden. Geben Sie Trypton in die mit Nährstoffen ergänzte Kultur bis zu einer Endkonzentration von 0,5 %. Verwenden Sie dann ein serumfreies Medium, um das Volumen der nicht ergänzten Kultur auszugleichen. Inkubieren Sie die Zellen für weitere sieben Tage.

Ab dem achten Tag der Kultivierung zählen Sie die Zellen täglich mit einem Hämozytometer, um die Lebensfähigkeit der Zellen zu überwachen. Sobald die Zellviabilität weniger als 80 % erreicht, wird die Kultur durch Zentrifugation bei 3.000 g für 15 Minuten geerntet. Anschließend wird der Überstand durch einen 0,22-Mikrometer-Filter filtriert. Lagern Sie die Überstände kurzfristig bei 4 Grad Celsius oder frieren Sie sie langfristig bei Grad Celsius ein.