Eine Affinitätschromatographie-Technik zur Aufreinigung von monoklonalen Antikörpern

Nehmen Sie eine Affinitätschromatographiesäule, die Agarosekügelchen enthält, die an Protein A, ein Antikörper-bindendes Protein, konjugiert sind.

Fügen Sie einen Bindungspuffer mit neutralem pH-Wert hinzu, um die Säule auszugleichen.

Laden Sie den Kulturüberstand aus einer Antikörper produzierenden Zellkultur, die monoklonale Antikörper enthält und zelluläre Proteine kontaminiert.

Der neutrale pH-Wert erleichtert die Bindung von Protein A an die Fc-Region der Antikörper, während die Verunreinigungen durchfließen.

Messen Sie die UV-Absorption der Strömung, um ein Chromatogramm zu erstellen. Eine hohe Extinktion während der Probenbeladung deutet auf ungebundene Proteine im Durchfluss hin.

Waschen Sie die Säule mit dem Bindepuffer, um unspezifisch gebundene Verunreinigungen zu entfernen.

Fügen Sie einen Elutionspuffer mit niedrigem pH-Wert hinzu, um die Interaktion zwischen Protein A und Antikörpern zu stören. Sammeln Sie die eluierten Antikörper, indem Sie den Absorptionspeak überwachen.

Neutralisieren Sie den pH-Wert, um einen Abbau der Antikörper zu verhindern, und übertragen Sie ihn in einen Zentrifugalfilter.

Zentrifugieren Sie, um die Antikörper zu konzentrieren, und resuspendi