Eine Immunfluoreszenz-Färbetechnik zum Nachweis der adulten Hippocampus-Neurogenese

Nehmen wir einen Hirnschnitt einer Maus, der aus dem Gyrus dentatus des Hippocampus besteht, einem Ort für die Neurogenese, der aus neuronalen Vorläuferzellen in unterschiedlichen Differenzierungsstadien besteht.

Übertragen Sie den Schnitt in eine Permeabilisierungs-blockierende Lösung. Detergensmoleküle in der Lösung permeabilisieren die Zellen, während die Proteine die unspezifischen Bindungsstellen blockieren.

Fügen Sie einen primären Antikörpercocktail hinzu, der auf spezifische Neurogenese-Marker abzielt, ein Mikrotubuli-assoziiertes Protein und ein intermediäres Filamentprotein.

Entfernen Sie die ungebundenen Antikörper. Führen Sie verschiedene Fluorophor-markierte Sekundärantikörper ein, die an die Primärantikörper binden.

Fügen Sie Serumproteine aus demselben Wirt hinzu, die wie einer der primären Antikörper stammen, und sättigen Sie die Paratope auf den sekundären Antikörpern.

Einführung monovalenter Fab-Fragmente, die die Epitope der Serumproteine sättigen und eine unspezifische Bindung verhindern.

Fügen Sie einen zweiten Primärantikörper hinzu, der mit demselben Wirt erhöht wurde und an ein anderes Zwischenfilamentprotein bindet.

Einführung von Fluorophor-markierten Seku