Eine Ganzbett-Organfärbetechnik für die dreidimensionale Bildgebung der Niere

Nehmen Sie eine feste Mausniere. Lipide im Gewebe verursachen Lichtstreuung, und Pigmente verursachen Lichtabsorption, wodurch die Zellen undurchsichtig werden.

Behandeln Sie das Gewebe mit CUBIC-L zur Entfettung und Entfärbung. Aminoalkohol in CUBIC-L entfernt Lipide und Pigmente, minimiert die Lichtstreuung und erhöht die Transparenz.

Detergenzienmoleküle in CUBIC-L permeabilisieren die Zellen ebenfalls.

Einführung eines primären Antikörpercocktails, der an zytoplasmatische Tyrosinhydroxylase in Neuronen der sympathischen Nerven und Alpha-Aktin der glatten Muskulatur in den glatten Muskelzellen der Gefäße bindet.

Fügen Sie mit Fluorophor markierte Sekundärantikörper hinzu, die an die Primärantikörper binden.

Führen Sie eine Gewebenachfixation durch, um die Antikörperbehandlung zu erhalten.

Tauchen Sie das Gewebe in CUBIC-R+, das Wasser ersetzt und dem Brechungsindex von Proteinen entspricht, wodurch die Lichtstreuung weiter minimiert und die Transparenz erhöht wird.

Unter einem Lichtblatt-Fluoreszenzmikroskop beleuchten Lichtblätter das Gewebe und regen die Fluorophore an.

Nehmen Sie das von Fluorophoren emittierte Licht auf und rekonstruieren Sie ein dreidimensionales Bild, das