Ein Peptid-Array-basierter Nachweis von Anti-Donor-HLA-Alloantikörpern bei Organempfängern

Nehmen Sie ein Peptidarray, das aus dem humanen Leukozytenantigen oder der HLA-Sequenz eines Organspenders gewonnen wurde, die aus verschiedenen Peptiden auf der Zellulosemembran besteht.

Jedes Peptid trägt mindestens eine Aminosäure-Diskrepanz zwischen der HLA-Sequenz des Spenders und des Empfängers, was ein potenzielles Epitop für eine Antikörper-vermittelte Organabstoßung darstellt.

Mit einem Blockierungspuffer behandeln, um eine unspezifische Antikörperinteraktion zu verhindern.

Fügen Sie das nach der Organtransplantation gesammelte Empfängerserum hinzu, das Alloantikörper enthält.

Diese Antikörper, die gegen das HLA des Spenders gebildet werden, binden an ihr Zielepitop.

Fügen Sie einen Peroxidase-konjugierten Sekundärantikörper hinzu, der an den Alloantikörper bindet.

Fügen Sie chemilumineszierendes Substrat und Wasserstoffperoxid hinzu. Die Peroxidase verwendet Wasserstoffperoxid, um das Substrat zu oxidieren und Licht zu emittieren.

Scannen Sie die Membran, um ein Bild zu erhalten.

Fügen Sie einen Puffer hinzu, um die gebundenen Antikörper zu entfernen. Erneute Sonde mit Empfängerserum vor der Transplantation und Aufnahme eines Bildes.

Im Vergleich zum Bild vor der Transpla