JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:57 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einem funktionalisierten Glykochip mit gedruckten Glykan-Subarrays, die in Blöcken von Arrays organisiert sind.
Jeder Punkt im Subarray repräsentiert ein bestimmtes Glykan – ein Polymer auf Kohlenhydratbasis mit Variationen in der Monosaccharidzusammensetzung, der Kettenlänge und dem Verzweigungsmuster.
Behandeln Sie den Glykochip mit einem Blockierungspuffer, um unspezifische Interaktionsstellen zu blockieren.
Übertragen Sie den Glykochip und geben Sie verdünntes Mausserum in einen mit Tensiden angereicherten Puffer, um die Antikörperaggregation zu minimieren. Unter Rühren inkubieren.
Das Rühren fördert eine gleichmäßige Serumverteilung und erleichtert die selektive Bindung von Anti-Glykan-Antikörpern an spezifische Glykane auf der Grundlage unterschiedlicher molekularer Eigenschaften.
Mit abnehmenden Konzentrationen eines tensidhaltigen Puffers waschen, um die unspezifische Bindung zu stören, und spülen.
Überlagern Sie den Glykochip mit Anti-Maus-Biotin-konjugierten Sekundärantikörpern, interagieren Sie mit vorgebundenen Anti-Glykan-Antikörpern und waschen Sie.
Einführung von Fluorophor-markiertem Streptavidin, das an biotinylierte Sekundärantikörper bindet. Wasc
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