JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:57 Min. • July 8th, 2025
Eine Kulturschale mit dechorionierten Zebrafischembryonen, die in Agarose eingebettet sind, über einen Mikroskoptisch legen.
Nehmen Sie eine Farbstofflösung, die eine geringe Konzentration von Antikörperkonjugaten enthält und einen rot fluoreszenzmarkierten Antikörper und einen Anti-DeltaD-Antikörper enthält.
Injizieren Sie die Farbstofflösung in den Hinterhirnventrikel des Embryos und zielen Sie dabei auf aktiv teilende radiale Glia-Vorläuferzellen (RGPs) ab.
Lassen Sie den eingebetteten Embryo frei und gewinnen Sie ihn in einem nährstoffreichen Medium zurück.
Während der Genesung interagieren fluoreszierende Konjugate mit einigen Notch-Liganden-DeltaD-Molekülen auf RGP und initiieren so die Internalisierung und Endosomenbildung.
Die niedrige Konjugatkonzentration ermöglicht es den ungebundenen DeltaD-Liganden, mit dem Notch-Rezeptor zu interagieren und den Notch-Signalweg in RGPs zu aktivieren.
Nach der Genesung wird ein anästhesierter Embryo mit Agarose zur Bildgebung mit der Rückenseite nach unten in eine Glasschale übertragen.
Führen Sie eine Zeitraffer-Fluoreszenzbildgebung durch, um die Zellteilung zu erfassen, die eine asymmetrische Aufteilung von DeltaD-haltigen fluoreszie
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