JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:39 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multi-Well-Platte mit Säugetierzellen, die in einem Hydrogelsystem eingekapselt sind, das die natürliche extrazelluläre Matrixumgebung nachahmt.
Entfernen Sie das Nährmedium. Mit einem Fixierungspuffer behandeln, um die Proteine zu vernetzen und die zelluläre Integrität zu erhalten.
Fügen Sie eine Lösung hinzu, die Detergens enthält, um die Zellmembran zu permeabilisieren.
Führen Sie in den nachfolgenden Schritten eine Blockierungslösung ein, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Fügen Sie einen primären Antikörpercocktail hinzu, der in die Zellen eindringt und spezifisch an zytoplasmatische Zwischenfilamente und den Zieltranskriptionsfaktor bindet.
Entfernen Sie die ungebundenen Antikörper. Führen Sie fluoreszenzmarkierte Sekundärantikörper und eine Kernfärbung ein, um die DNA fluoreszierend zu markieren.
Entfernen Sie die ungebundenen Moleküle.
Montieren Sie die Hydrogelkultur mit einem Einbettmedium auf einen Objektträger.
Verwenden Sie ein konfokales Mikroskop, um die immungefärbten Zellen zu beobachten.
Saugen Sie zuerst das Medium aus jeder Vertiefung an. Waschen Sie dann die Vertiefungen mit 1 Milliliter warmem DPBS. Geben Sie nach Abschluss
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