Eine In-vitro-Technik zur Untersuchung des Glutamatrezeptor-Handels in Hippocampus-Neuronen

Entnehmen Sie drei Proben von neuronalen Kulturen des Hippocampus auf Deckgläsern.

Einführung von Primärantikörpern zur Markierung der oberflächenexprimierten Glutamatrezeptoren.

Der zweiten und dritten Probe wird ein konditioniertes Medium zugesetzt, um die Endozytose der Antikörper-gebundenen Rezeptoren zu induzieren.

Fügen Sie bei der dritten Probe Fab-Fragmente hinzu, um Epitope auf den nicht endozytierten Antikörpern zu blockieren.

Führen Sie einen Inhibitor ein, um die Rezeptorendozytose zu blockieren und gleichzeitig das Rezeptorrecycling an die Oberfläche zu ermöglichen.

Fixieren Sie in allen Proben die Zellen und fügen Sie eine Blockierungslösung hinzu, um eine unspezifische Markierung zu verhindern.

Einführung von Fluorophor-markierten Sekundärantikörpern zur Markierung der primären Antikörper auf den oberflächengebundenen Rezeptoren, einschließlich der recycelten.

Permeabilisieren Sie die Zellmembranen.

Geben Sie den Primärantikörper erneut in die erste Probe, um die bereits vorhandenen endozytierten Rezeptoren zu markieren.

Führen Sie allen Proben einen anderen Fluorophor-markierten Sekundärantikörper zu, um die endozytierten rezeptorgebundenen Primärantikörper zu marki