Ein In-vitro-Assay zur Messung der Antikörper-abhängigen zellulären Phagozytose durch Phagozyten

Nehmen Sie fluoreszenzmarkierte Mikrosphären, die an ein Antigen von Interesse konjugiert sind. Die immobilisierten Antigene sind an antigenspezifische Antikörper gebunden.

Fügen Sie Leukozyten hinzu, einschließlich nicht-phagozytärer Lymphozyten, phagozytärer Granulozyten und Monozyten. Inkubieren Sie die Mischung unter physiologischen Bedingungen.

Die Fc-Region des immobilisierten Antikörpers bindet an den Fc-Rezeptor auf dem Phagozyten und löst so die Antikörper-abhängige zelluläre Phagozytose (ADCP) aus.

Zentrifugieren Sie, um die Zellen zu pelletieren, und entsorgen Sie den Überstand mit den nicht internalisierten Mikrosphären.

Fügen Sie einen Lebensfähigkeitsfleck hinzu, der in abgestorbene Zellen eindringt und sie fluoreszierend markiert.

Zentrifugieren Sie, um die Zellen zu pelletieren und den Überstand zu entfernen.

Fügen Sie fluoreszenzmarkierte Antikörper hinzu, die an Leukozyten binden.

Zentrifuge, um den Überstand zu verwerfen und die Zellen zu fixieren.

Beseitigen Sie mit Hilfe der Durchflusszytometrie zunächst die abgestorbenen Zellen, die positiv für die Viabilitätsfärbung sind.

Wählen Sie dann die lebensfähigen Leukozyten aus und unterscheiden Sie zwischen Granuloz