JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:24 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie ein Röhrchen, das eine Suspension menschlicher Darmbakterien enthält.
Fügen Sie humane Norovirus-Virus-ähnliche Partikel oder VLPs hinzu. Die VLPs enthalten ein intaktes virales Kapsid, aber keine genomische RNA, so dass sie für den Menschen nicht infektiös sind.
Während der Inkubation binden die VLP-Kapsidproteine an spezifische Kohlenhydrate, die auf der Bakterienoberfläche exprimiert werden, und bilden VLP-Bakterien-Komplexe.
Zentrifugieren Sie, um die Komplexe zu pelletieren und die ungebundenen VLPs zu verwerfen.
Führen Sie eine proteinhaltige Blockierungslösung ein, um unspezifische Antikörperbindungsstellen zu blockieren und die Hintergrundfärbung in den nachfolgenden Schritten zu reduzieren.
Fluoreszenzmarkierte VLP-spezifische Antikörper zugeben und inkubieren.
Die Antikörper binden an ihre Zielstellen auf dem VLP-Kapsid und markieren so die VLP-Bakterienkomplexe.
Zentrifugieren Sie, um die Komplexe zu pelletieren. Ungebundene Antikörper werden verworfen und das Pellet in einem Durchflusszytometrie-Puffer resuspendiert.
Mit einem Durchflusszytometer können Fluoreszenzsignale detektiert werden, die von VLP-Bakterienkomplexen emittiert werden, und so der Prozentsa
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