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Immunologie
0 Aufrufe • 5:01 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Kryosektion des Nierenzellkarzinomgewebes, die infiltrierende CD8+ T-Zellen in ihrer Tumormikroumgebung zeigt.
Behandeln Sie es mit Aceton, um das Gewebe zu fixieren und zu permeabilisieren. Waschen, um überschüssiges Aceton zu entfernen.
Fügen Sie Avidin hinzu, um endogenes Gewebebiotin zu sättigen. Fügen Sie als Nächstes Biotin hinzu, um immobilisierte Avidin-Bindungsstellen zu blockieren und unspezifische Wechselwirkungen zu minimieren.
Tragen Sie ein immunglobuline enthaltendes Serum auf, um die Fc-Rezeptoren der Immunzellen zu blockieren und eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Fügen Sie einen primären Antikörpercocktail hinzu, der auf CD8, einen zytotoxischen T-Zell-Marker, und PD-1 und Tim-3 abzielt, inhibitorische Rezeptoren, die von CD8+ T-Zell-Subpopulationen exprimiert werden, die gegen Immuntherapie resistent sind.
Einführung unterschiedlicher Fluorophor-markierter Sekundärantikörper, die auf Anti-CD8- und Anti-Tim-3-Antikörper abzielen.
Fügen Sie biotinylierte Sekundärantikörper hinzu, die auf Anti-PD-1-Antikörper abzielen, und eine andere Fluorophor-markierte Streptavidin-Bindung, die an Biotin bindet.
Tragen Sie ein farbstoffhaltiges Ei
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