Eine in vitro Methode zur Identifizierung von angeborenen und adaptiven Immunzellen, die sich in der Lunge von Mäusen befinden

Nehmen Sie gehacktes murines Lungengewebe in einen Verdauungspuffer und inkubieren Sie es bei physiologischer Temperatur.

Pufferenzyme brechen die Gewebematrix auf und lockern die Zellen auf.

Trituieren, um die Zellmasse zu dissoziieren, und filtrieren Sie die Suspension mit einem Sieb, um die einzelnen Zellen zu isolieren.

Zentrifugieren, um den Überstand mit Geweberesten zu entfernen. Inkubieren Sie die Zellen mit einem Lysepuffer, um die roten Blutkörperchen zu lysieren.

Zentrifugieren, um den Zelltrümmer, der den Überstand enthält, zu verwerfen. Resuspendieren Sie die Zellen und übertragen Sie sie auf eine Mikroplatte.

Fügen Sie Antikörper hinzu, um die Fc-Rezeptoren zu blockieren und Hintergrundfärbungen zu verhindern.

Einführung eines mit Fluorophoren markierten Antikörpercocktails, der auf spezifische Oberflächenmarker auf den angeborenen Immunzellen – Monozyten, Makrophagen, dendritischen Zellen, natürlichen Killerzellen, Neutrophilen, Eosinophilen und adaptiven Immunzellen – B- und T-Lymphozyten – abzielt.

Fixieren und permeabilisieren Sie die Zellen. Fügen Sie fluorophormarkierte Antikörper hinzu, die spezifisch für einen intrazellulären Marker auf Monozyten, Makrophagen,