Messung der phagozytären Effizienz von Makrophagen mit Primaquin und photodynamischer Therapie

Beginnen Sie mit einer Multi-Well-Platte, die adhärente murine Makrophagen – oder phagozytäre Immunzellen – enthält.

Führen Sie eine Pilzzellsuspension von Cryptococcus ein, die mit Makrophagenrezeptoren interagiert und über Phagozytose internalisiert.

Das Phagosom verschmilzt mit dem Lysosom und bildet ein Phagolysosom. Das saure Milieu des Phagolysosoms begünstigt das Überleben und die Vermehrung von Pilzen.

Geben Sie eine hohe Konzentration von Primaquin – einem Photosensibilisator – in die Testvertiefungen, während der Kontrolle der Photosensibilisator fehlt. Inkubieren, um die Aufnahme von Primaquin durch Makrophagen zu erleichtern.

Setzen Sie die Platte ultraviolettem Licht für die photodynamische Behandlung oder PDT aus.

In der Testvertiefung bildet Primaquin radikalische Kationen, die mit molekularem Sauerstoff interagieren und reaktive Sauerstoffspezies (ROS) erzeugen.

ROS induzieren den Absterben von Pilzen, während antioxidative Enzyme von Makrophagen ROS neutralisieren und so Zellschäden verhindern.

Permeabilisieren Sie die Makrophagen und setzen Pilzzellen frei.

Verteilen Sie den verdünnten Zellinhalt auf selektiven Agarplatten, so dass sich unterschiedliche Pilzkoloni