JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 5:43 Min. • January 15th, 2026
Nehmen Sie eine STop And Go Extraction oder STAGE Tip, eine miniaturisierte Aufreinigungssäule.
Die Spitze enthält kleine Kieselsäurekügelchen, die an lange Kohlenwasserstoffketten gebunden sind, um eine hydrophobe Peptidreinigung auf der Grundlage von Wechselwirkungen
zu ermöglichen.Mit Puffern waschen, die einen hohen Anteil an Acetonitril enthalten, um Harzverunreinigungen zu entfernen.
Führen Sie einen Bindungspuffer und eine Zentrifuge ein, wobei die Säule für eine optimale Peptidbindung äquilibriert wird.
Laden Sie eine vorverdaute Peptidprobe, die aus differenzierten neutrophilenähnlichen Zellen gewonnen wurde und Peptidfragmente und Verunreinigungen, einschließlich Salze, enthält.
Zentrifugieren, um die Probe durch die Säule zu leiten. Die Peptidfragmente binden über hydrophobe Wechselwirkungen an die Kohlenwasserstoffketten, während die Salze entfernt werden.
Fügen Sie den Bindungspuffer und die Zentrifuge hinzu und entfernen Sie die restlichen Verunreinigungen.
Führen Sie den hochacetonitrilhaltigen Puffer für die Elution ein.
Führen Sie den Puffer mit einer Spritze durch die Säule. Acetonitril bindet an die Kohlenwasserstoffketten und verdrängt die Peptidfragmente, die
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