Assays zur qualitativen und quantitativen Bestimmung der Glukosekonzentration im Urin von Mäusen
JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 Ansichten • 4:42 Min. • January 15th, 2026
Nehmen Sie einen Tropfen frischen Mäuseurin und tauchen Sie einen Glukosenachweisstreifen ein, der Glukoseoxidase, Peroxidase und Chromogen enthält.
Glukoseoxidase oxidiert Glukose im Urin und bildet Gluconolacton und Wasserstoffperoxid.
Darüber hinaus verwendet die Peroxidase Wasserstoffperoxid, um die Oxidation des Chromogens zu katalysieren und ein farbiges Produkt zu bilden, dessen Intensität proportional zur Glukosekonzentration im Urin ist.
Vergleichen Sie die Farbe mit der Referenztabelle des Streifens zur qualitativen Beurteilung des Uringlukosespiegels.
Für die quantitative Glukosemessung im Urin nehmen Sie eine Multi-Well-Platte mit Glukosekonzentrationsstandards und die Urinprobe der Maus, die über einen definierten Zeitraum entnommen wurde.
Fügen Sie eine Assay-Mischung hinzu, die Glukoseoxidase, Peroxidase und Indikatorkupplungsreagenzien enthält.
Glukoseoxidase erleichtert die Oxidation von Glukose und bildet Gluconolacton und Wasserstoffperoxid. Die Peroxidase katalysiert die Reaktion zwischen Kopplungsreagenzien und Wasserstoffperoxid und bildet ein rosafarbenes Produkt.
Messen Sie mit einem Mikroplatten-Reader die Absorption des farbigen Produkts.
Bestimmen Sie mit der generierten Glukose-Standardkurve die Glukosekonzentration im Urin.
Beginnen Sie damit, ein Stück sauberen Parafilm auf eine ebene Fläche zu legen. Heben Sie die Maus vorsichtig am Schwanz auf und legen Sie sie auf den Parafilm.
Halten Sie die Maus mit Daumen und Zeigefinger am Genick fest, wodurch die Maus als Stressreaktion uriniert. Lassen Sie einen Tropfen Urin auf die Parafilmoberfläche fallen und bringen Sie die Maus dann wieder in ihren Käfig zurück.
Tauchen Sie das Reagenzende eines Glukosenachweisstreifens in den frischen Urintropfen. Entfernen Sie den Streifen sofort und legen Sie ihn flach mit der Farbseite nach oben auf eine Fläche. Warten Sie dann mindestens 30 Sekunden, bis sich eine Farbe auf dem Streifen vollständig entwickelt hat. Vergleichen Sie die entwickelte Farbe mit der vom Hersteller bereitgestellten Referenztabelle.
Montieren Sie den Stoffwechselkäfig gemäß den Anweisungen des Herstellers, füllen Sie die Futtereinheit mit pulverförmigem Futter und befestigen Sie es dann an der entsprechenden Metalllasche an der oberen Kammer.
Befestigen Sie die Halterung der Wasserflasche an der restlichen Metalllasche an der oberen Kammer. Füllen Sie die leere Wasserflasche und schieben Sie sie in die Flaschenhalterung, wobei Sie darauf achten, dass sich der Trinkschlauch im Loch befindet.
Setzen Sie eine einzelne Maus in den Stoffwechselkäfig ein und decken Sie ihn mit dem Deckel ab, um sicherzustellen, dass der Käfigdeckel richtig sitzt. Positionieren Sie das Urinauffangröhrchen und das Kotauffangröhrchen an den entsprechenden Stellen im unteren Kammerboden.
Nehmen Sie nach 24 Stunden das Urinsammelröhrchen und führen Sie einen Glukosetest durch, um die Glukosekonzentration im Urin zu bestimmen. Wenn der Glukosetest nicht am selben Tag durchgeführt wird, frieren Sie die Urinprobe in einem Gefrierschrank bei minus 80 Grad Celsius ein.
Wenn Sie eine gefrorene Urinprobe verwenden, tauen Sie diese zuerst auf. Bereiten Sie acht Standards im Bereich von 25 bis 0 Milligramm pro Deziliter vor, entsprechend den Anweisungen des Assay-Kits.
Bereiten Sie Standard-Wells und Urinproben-Wells in einer 96-Well-Platte vor, alles in Duplikaten, gemäß dem Kit-Handbuch. Initiieren Sie die Reaktion, indem Sie die empfohlene Menge der Enzymmischung in alle Vertiefungen geben. Decken Sie den Teller ab und lassen Sie ihn 10 Minuten bei 37 Grad Celsius inkubieren. Lesen Sie dann die Absorption bei 500 bis 520 Nanometern mit einem Plattenlesegerät ab.
Analysieren Sie die Daten gemäß den Anweisungen des Assay-Kits und stellen Sie die Absorption jedes Standards im Vergleich zur Glukosekonzentration dar. Verwenden Sie dieses Diagramm, um die Glukosekonzentration der 24-Stunden-Urinprobe zu bestimmen. Wenn die Konzentration des Urins außerhalb des Normbereichs liegt, verdünnen Sie die Urinprobe.
Übersicht
Dieser Artikel beschreibt eine Methode zur Messung der Glukosekonzentration in Mäuseurin mithilfe von Glukoseteststreifen und einem Mehrlochplatten-Assay. Der Prozess umfasst sowohl qualitative als auch quantitative Bewertungen der Glukosespiegel im Urin.
Wesentliche Studienkomponenten
Bereich der Wissenschaft
- Neurowissenschaften
- Biokemie
- Stoffwechsel
Hintergrund
- Die Glukosemessung ist entscheidend für das Verständnis metabolischer Prozesse.
- Mausmodelle werden häufig in der Stoffwechselforschung eingesetzt.
- Harnanalysen bieten eine nichtinvasive Methode zur Glukoseüberwachung.
- Teststreifen ermöglichen eine schnelle qualitative Beurteilung.
Zweck der Studie
- Entwicklung einer zuverlässigen Methode zur Messung der Glukosekonzentration im Urin von Mäusen.
- Vergleich qualitativer und quantitativer Methoden zur Glukosemessung.
- Unterstützung metabolischer Untersuchungen in Mausmodellen.
Verwendete Methoden
- Sammlung frischer Mäuseurinproben.
- Verwendung von Glukosedetektionsstreifen zur qualitativen Analyse.
- Vorbereitung einer Mehrfachbrunnenplatte zur quantitativen Glukosemessung.
- Nutzung eines Mikroplattenlesegeräts zur Analyse der Absorption des farbigen Produkts.
Hauptergebnisse
- Die Farbänderung auf Nachweisstreifen korreliert mit der Glukosekonzentration im Urin.
- Quantitative Ergebnisse können mithilfe einer Standardkurve aus bekannten Glukosekonzentrationen erhalten werden.
- Das Verfahren ermöglicht eine genaue Glukosemessung in Harnproben.
- Gefrorene Harnproben können aufgetaut und analysiert werden, ohne dass die Genauigkeit verloren geht.
Schlussfolgerungen
- Die beschriebenen Methoden bieten wirksame Mittel zur Glukoseüberwachung in Mäuseurin.
- Sowohl qualitative als auch quantitative Ansätze sind wertvoll für die Stoffwechselforschung.
- Diese Technik kann das Verständnis von Stoffwechselstörungen bei Mäusen verbessern.
Häufig gestellte Fragen
Ausschlaggebende Bedeutung für die Industrie
Die zuverlässige Bestimmung der Glukosekonzentration in der Mausurin ist entscheidend für das Modellieren von Stoffwechselerkrankungen und die Validierung von Wirkstoffzielen im frühen Stadium in der Biopharma-Forschung&D. Die Kombination qualitativer und quantitativer Urin-Glukose-Assays ermöglicht eine robuste Hypothesenprüfung und unterstützt die translationale Kontinuität von der Entdeckung bis zur präklinischen Forschung. Diese Methoden bilden die Grundlage für eine verlässliche Vorhersage bei der Untersuchung metabolischer Signalwege und erleichtern risikoadjustierte Portfolioentscheidungen.
Strategische Anwendungen in der Biopharma-Forschung&D
Frühe Entdeckung und Zielvalidierung
- Ermöglicht die Untersuchung der Funktion metabolischer Signalwege in krankheitsrelevanten Mausmodellen.
- Unterstützt die biologische Ent风险bewertung, indem direkte Messgrößen für eine gestörte Glukoseregulation bereitgestellt werden.
- Erleichtert die funktionelle Zielstrukturvalidierung durch quantitative Biomarker-Messung.
- Verbessert die Vorhersagesicherheit für die Weiterentwicklung von Programmen zu Stoffwechselerkrankungen.
Screening und Assay-Entwicklung
- Bereitet validierte biologische Systeme für nachgeschaltete Wirkstoff-Screening-Workflows vor.
- Standardisiert Assay-Bedingungen für reproduzierbare und quantitative Glukosemessung.
- Ermöglicht skalierbare, plattenbasierte Detektionen, die für Hochdurchsatz-Screenings geeignet sind.
- Ermöglicht zuverlässige Bewertung pharmakologischer Interventionen in Stoffwechselstudien.
Translationale und präklinische Forschung
- Ergänzt translationale Biomarker-Strategien, indem ein klinisch relevanter Endpunkt quantifiziert wird.
- Stellt die Kontinuität von der frühen Entdeckung bis zur präklinischen Validierung in metabolischen Modellen sicher.
- Liefert risikoadjustierte Daten, um Entscheidungen über die Weiterentwicklung metabolischer Zielstrukturen zu unterstützen.
- Bietet mechanistische Entlastung von Risiken, indem molekulare Interventionen mit funktionellen Ergebnissen verknüpft werden.
Pipeline- und Workflow-Integration
Urinteststreifen für Glukose nehmen eine zentrale Position innerhalb des Fortschritts von der Entdeckung bis zur präklinischen Phase ein und ermöglichen die Überprüfung von Hypothesen, die Entwicklung von Assays sowie die translationale Abstimmung von Biomarkern für die Forschung zu Stoffwechselerkrankungen.
- Entdeckungsbiochemie: Unterstützt die Überprüfung von Nullhypothesen und die Aufklärung von Wegen in Stoffwechselmodellen.
- Screening: Bietet standardisierte, quantitative Ergebnisse zur Beurteilung von Verbindungen.
- Analytik: Liefert absorbanzbasierte Messungen für einen robusten statistischen Vergleich experimenteller Bedingungen.
- Translationale Forschung: Verbindet Erkenntnisse aus der Grundlagenforschung mit der präklinischen Validierung von Biomarkern.
- Unternehmensweite Wiederverwendung: Bietet eine wiederverwendbare Plattform für die metabolische Phänotypisierung in unterschiedlichen Forschungsprogrammen.
Operative und unternehmerische Auswirkungen
- Wissenschaftlicher Wert: Erhöht die Vorhersagesicherheit und verringert mechanistische Mehrdeutigkeiten in der Stoffwechselforschung.
- Operationaler Wert: Verbessert die Standardisierung, Reproduzierbarkeit und Skalierbarkeit von Glukose-Assays.
- Strategischer Wert: Verbessert die Entscheidungsfindung hinsichtlich der Weiterentwicklung von Projekten und die Kapitalnutzungseffizienz in frühen Portfoliophasen.
- Portfolio-Implikation: Ermöglicht die risikoadjustierte Priorisierung und Weiterentwicklung von Wirkstoffen gegen Stoffwechselerkrankungen.
Durchführungsaspekte
- Erfordert Fachkenntnisse im Umgang mit Mäusen und der metabolischen Phänotypisierung.
- Benötigt Zugang zu Mikroplattenlesegeräten und validierten Testkits für die quantitative Analyse.
- Setzt eine standardisierte Vorgehensweise über mehrere Arbeitsgruppen hinweg bei der Urinsammlung und den Testprotokollen voraus.
- Einsatzmöglichkeiten in verschiedenen Mausmodellen und metabolischen Forschungskontexten gegeben.
- Abhängig von der genauen Erstellung von Standardkurven und der Verdünnung von Proben bei Konzentrationen außerhalb des Messbereichs.
Biopharma-Häufig gestellte Fragen
Die Bestimmung Glucose Metabolism Kinetics Verwendung
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Zuletzt aktualisiert: 29 August 2026