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Immunologie
0 Aufrufe • 3:34 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit virusinfizierten Säugetierzellen, die mehrere Caspasen, einschließlich Caspase-3, produzieren.
Geben Sie ein Wachstumsmedium in die Kontrollvertiefung und ein mit Caspase-3-Inhibitoren ergänztes Medium in die Testvertiefung.
In der Kontrollvertiefung erkennt und baut Caspase-3 die viralen Nukleoproteine und Wirtsproteine ab, die für die Virusvermehrung essentiell sind.
In der Testvertiefung dringt der Inhibitor in die Zelle ein, hemmt die Caspase-3-Aktivität und verhindert den Proteinabbau.
Zellen von der Platte lösen. Fügen Sie ein Lysereagenz und Hitze hinzu, um die Zelllyse zu induzieren und intrazelluläre Proteine freizusetzen.
Laden Sie beide Proben auf ein SDS-Polyacrylamid-Gel und eine Elektrophorese, um Proteine nach Größe zu trennen.
Nach der Elektrophorese übertragen Sie das Gel auf eine Löschmembran.
Behandeln Sie die Membran mit Primärantikörpern gegen virale Nukleoproteine und Wirtsproteine.
Waschen und Überlagern mit Fluorophor-konjugierten Sekundärantikörpern, die an Primärantikörper binden und Fluoreszenzbanden erzeugen.
Die höhere Fluoreszenz in der Testprobe deutet auf eine reduzierte Caspase-3-vermittelte Spaltung von Viren und Wirtsproteinen im
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