Isolierung invarianter natürlicher Killer-T-Zellen aus einem Mausmodell
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Immunologie
0 Aufrufe • 3:35 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit der intraperitonealen Injektion eines synthetischen Glykolipids in eine Maus.
Antigen-präsentierende Zellen (APCs) internalisieren das Glykolipid und präsentieren es über das nicht-klassische MHC-Molekül CD1d.
Die APCs wandern in die Milz und interagieren mit den invarianten natürlichen Killer-T-Zellen oder iNKT-Zellen, wodurch die Aktivierung und Proliferation der iNKT-Zellen induziert wird.
Ernte die Milz. Dissoziieren Sie es mechanisch, um eine einzellige Suspension zu erzeugen.
Übertragen Sie die Zellen in ein Röhrchen. Fügen Sie ein Dichtegradientenmedium hinzu und zentrifugieren Sie, um die Lymphozyten zu trennen.
Sammeln Sie die Lymphozyten. Fügen Sie Glykolipid-Antigen-beladene Fluorophor-markierte CD1d-Tetramere hinzu, die mit den iNKT-Zellen interagieren.
Ungebundene Tetramere entfernen. Überlagerung mit magnetischen Mikrokügelchen, die an die tetramergebundenen Fluorophore binden.
Entfernen Sie die ungebundenen Kügelchen und laden Sie die Zellsuspension auf eine Magnetsäule.
Unter dem Magnetfeld werden die bead-gebundenen iNKT-Zellen in der Säule zurückgehalten, während die restlichen Zellen hindurchfließen.
Entfernen Sie die Säule aus dem Magnetfeld. Fü
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