Eine ex vivo-Technik zur Herstellung chimärer Antigenrezeptor-T-Zellen

Nehmen Sie primäre T-Zellen, gemischt mit Antikörper-konjugierten magnetischen Kügelchen in einem Interleukin-2-supplementierten Medium, und inkubieren Sie.

Die Antikörper binden an CD3 im T-Zell-Rezeptorkomplex und den co-stimulatorischen Rezeptor CD28, während Interleukin-2 an seinen verwandten Rezeptor bindet, was zu einer Aktivierung und Proliferation der T-Zellen führt.

Führen Sie lentivirale Vektoren mit einer transgenen RNA ein, die für einen chimären Antigenrezeptor oder CAR kodiert, und inkubieren Sie.

Bei der Fusion der Vektorzellmembran durchläuft die virale RNA eine reverse Transkription in die DNA und integriert sich in das Wirtsgenom.

Die transduzierten T-Zellen exprimieren oberflächengebundene CARs.

Ernten Sie die Zellen in definierten Intervallen.

Für die Kryokonservierung nehmen Sie ein Aliquot von Zellen, lösen die gebundenen Kügelchen durch Pipettieren und trennen sie magnetisch.

Schleudern Sie die Zellen herunter und resuspendieren Sie sie in einem Kryokonservierungsmedium.

Frieren Sie die Zellen ein und lagern Sie sie bei kryogener Temperatur.

Um die CAR-Expression zu beurteilen, nehmen Sie ein weiteres Aliquot von Zellen, drehen Sie die Zellen herunter und res