JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 Ansichten • 2:26 Min. • July 8th, 2025
Nehmen wir eine immungeschwächte Maus, die nur Neutrophile und Monozyten als funktionsfähige Immunzellen besitzt.
Intraperitoneal injizieren Sie Cyclophosphamid, ein Medikament, das auf Immunvorläuferzellen abzielt.
Das Medikament dringt in aktiv proliferierende Immunvorläuferzellen ein und vernetzt Nukleinsäuren, was zum Zelltod führt. Der Tod von Vorläuferzellen führt zu einer Depletion der Immunzellen.
Verabreichen Sie oral Disulfiram, ein Medikament, das ein Addukt mit Cyclophosphamid bildet und die durch Cyclophosphamid induzierten Nebenwirkungen reduziert.
Injizieren Sie subkutan eine Mischung aus menschlichen Tumorzellen und mononukleären Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) in eine geeignete gallertartige Proteinmischung.
Das Proteingemisch bildet ein Gel, das die physiologische extrazelluläre Matrix nachahmt, und schließt die Tumorzellen ein.
Die funktionelle Depletion der Immunzellen ermöglicht es den Tumorzellen, sich zu vermehren und neue Blutgefäße zu bilden, die sich in ein solides Tumor-Xenotransplantat verwandeln.
Gleichzeitig infiltrieren T-Zellen aus den injizierten PBMCs den Tumor.
Das Tumor-Xenotransplantat weist Wachstums- und tumorinfiltrierende T-Zellen auf, wodurch ein humanisiertes Xenotransplantat-Mausmodell etabliert wird.
Bei myeloischer Zelldepletion geben Sie intraperitoneal 100 Milligramm pro Kilogramm Cyclophosphamid und oral 125 Milligramm pro Kilogramm Disulfiram an 6 bis 8 Wochen alte weibliche NOD/SCID-Mäuse einmal täglich für zwei Tage. 24 Stunden nach der zweiten Dosis von Cyclophosphamid und Disulfiram resuspendieren Sie 5 x 106 frisch isoliertes humanes PBMC und 2,5 x 106 humane Tumorzelllinienzellen in 200 Mikroliter PBS plus 50 % Matrigel pro Tier und injizieren Sie das gesamte Volumen subkutan in die rechte Flanke jedes Versuchstieres. Messen und erfassen Sie das Primärtumorvolumen 2 Mal pro Woche für 4 bis 6 Wochen.