JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 Ansichten • 2:12 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer anästhesierten weiblichen Maus in Rückenlage, die Urotheltumoren in ihrem Blasenepithel trägt.
Sichern Sie die Hinterbeine, lokalisieren Sie die Harnröhrenöffnung und führen Sie einen Katheter in die Blase der Maus ein. Waschen Sie die Blase, um den Urin zu entfernen.
Injizieren Sie Helicobacter pylori, ein neutrophilenaktivierendes Protein oder HP-NAP – ein immunmodulatorisches bakterielles Protein.
In der Mikroumgebung des Tumors interagiert HP-NAP mit Toll-like-Rezeptoren auf Neutrophilen und initiiert eine Signalkaskade, die die proinflammatorische Zytokinexpression erhöht.
Die Zytokine lösen die Differenzierung von naiven T-Lymphozyten in Typ-1-T-Helfer (Th1) und zytotoxische Typ-1-Lymphozyten (Tc1) aus, die Interferon-gamma produzieren.
Interferon-gamma hemmt die Bildung neuer Blutgefäße und schränkt die Verfügbarkeit von Nährstoffen und Sauerstoff für den Tumor ein.
Darüber hinaus reguliert es Tumorantigen-präsentierende MHC-Moleküle auf den Tumorzellen hoch, was die Interaktion mit Tc1-Zellen erleichtert.
Diese Wechselwirkung führt zur Freisetzung zytotoxischer Moleküle, die den Zelltod des Tumors induzieren, was die Anti-Tumor-Wirksamkeit von HP-NAP demonstriert.
Mindestens drei Tage nach der Injektion der MB-49-Zellen wird nach der Betäubung des Tieres wie gerade gezeigt katheterisiert und mit einer 1-Milliliter-Spritze mit 200 bis 300 Mikrolitern sterilem PBS der Restharn aus der Blase gewaschen und die gesamte Flüssigkeit abgesaugt.
Injizieren Sie 50 Mikrogramm Helicobacter pylori Neutrophilen-aktivierendes Protein oder HPNAP pro 150 Mikroliter PBS in die Blase und lassen Sie die Spritze am Katheter befestigt, um ein Auslaufen zu vermeiden. Entfernen Sie nach einer Stunde vorsichtig den Katheter aus der Harnröhre und legen Sie die Maus in einen Käfig unter einer Heizlampe, bis sie erwacht.