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Immunologie
0 Aufrufe • 2:50 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie T-Zellen mit Rezeptoren, die an die Antigene des Hepatitis-B-Virus (HBV) binden.
Injizieren Sie die T-Zellen in die Schwanzvene einer Maus.
Lassen Sie die injizierten Zellen sich in der Leber ausbreiten.
Um eine Virusinfektion nachzuahmen, nehmen Sie Plasmide, die das HBV-Genom tragen.
Injizieren Sie die Plasmide schnell in die Schwanzvene und leiten Sie die Plasmide in die Leber.
Die Kraft der Flüssigkeit permet das Gefäßendothel und erzeugt temporäre Poren in den Zellen.
Die Plasmide dringen in die Zelle ein und durchlaufen eine RNA-Synthese, wobei mRNA entsteht, die für die virale Proteinproduktion verwendet wird.
Einige dieser Proteine fungieren als virale Antigene.
Die Antigen-präsentierenden Moleküle transportieren die viralen Antigene an die Zelloberfläche und setzen sie den T-Zellen aus.
Diese Immunzellen interagieren mit den viralen Antigenen und initiieren Mechanismen zur Eliminierung der infizierten Zellen, wodurch die Assemblierung und Ausbreitung viraler Proteine gehemmt wird.
Für die hydrodynamische HPV-Plasmidabgabe durch die Schwanzvene verdünnen Sie 10 Mikrogramm HPV-Plasmid in einem 8%igen Äquivalent der Körpermasse von PBS. Laden Sie das Plasmid in eine 3-Milliliter-Spritze, die mit einer 26-Gauge-Half-Inch-Nadel pro Maus ausgestattet ist.
Erhitzen Sie HHD-Mäuse fünf Minuten lang unter einer Wärmelampe, um die Schwanzvenen zu erweitern, und ziehen Sie eine Maus vorsichtig in einen Plastikbeutel. Lokalisieren Sie eine erweiterte laterale Schwanzvene im mittleren Drittel des Schwanzes und führen Sie die Nadel parallel zur Vene ein, um das gesamte Plasmidvolumen über einen Zeitraum von drei bis fünf Sekunden durch die Schwanzvene zu leiten.
Für den adoptiven Zelltransfer von viralen Antigenen aus iPSC-abgeleiteten CD8-positiven T-Zellen werden die CD8-positiven T-Zellen der iPSC am Tag 22 der Kultur wie gezeigt entnommen und die Zellen auf eine neue 10 Zentimeter große Zellkulturschale ausgesät.
Nach 30 Minuten im Zellkultur-Inkubator filtrieren Sie die schwimmenden Zellen durch ein 70-Mikrometer-Nylonsieb und zählen die lebensfähigen Zellen. Verdünnt wird bis zu einer PBS-Konzentration von 1,5 x 107 Zellen pro Milliliter verkauft.
Injizieren Sie 200 Mikroliter Zellen in einzelne vier bis sechs Wochen alte HHD-Mäuse in die Schwanzvene, wie gerade gezeigt. Führen Sie am Tag 14 nach dem Zelltransfer eine hydrodynamische HPV-Plasmidabgabe durch, wie gezeigt.