JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:42 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie retrovirale Vektoren, die mit primären Milzzellen gemischt sind.
Die Vektoren enthalten transgene RNA, die für einen chimären Antigenrezeptor (CAR) kodiert, der auf ein tumorspezifisches Antigen abzielt.
Das Zytokin Interleukin-2 in den Medien fördert selektiv die Proliferation der T-Zellen, während die anderen Zellen schließlich absterben.
Übertragen Sie die Mischung auf eine Mikrotiterplatte, die mit rekombinanten Fibronektinfragmenten beschichtet ist.
Zentrifugieren, um die Fibronektinfragmente zu erleichtern, die die Vektoren und T-Zellen binden, die Interaktion zwischen Virus und Wirtszelle zu vermitteln, und inkubieren.
Nach der Fusion der Hülle der Vektoren mit der Zellmembran transkribieren die viralen Enzyme die freigesetzte RNA in DNA und bauen sie in das Wirtsgenom ein.
Die transduzierten T-Zellen exprimieren oberflächengebundene CARs, die aus einem extrazellulären Antikörper-Variablenfragment bestehen, das auf das tumorspezifische Antigen abzielt, und intrazellulären Signalregionen, um auf das Antigen zu reagieren.
Resuspendieren Sie die Zellen, bevor Sie sie in ein Röhrchen übertragen.
Zentrifugieren Sie, um den Überstand mit nicht internalisierten Viren zu
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos