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Immunologie
0 Aufrufe • 2:55 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer Suspension von T-Zellen und behandeln Sie sie mit CAR-Lentiviren, die ein Gen für den chimären Antigenrezeptor oder CAR- und CRISPR-Lentiviren tragen.
Das CRISPR-Lentivirus enthält Gene für die Guide-RNA und die Cas9-Nuklease sowie ein Antibiotikaresistenzgen.
Sowohl das CAR- als auch das CRISPR-Lentivirus interagieren mit T-Zellen und setzen deren RNA frei.
Diese RNAs werden rückwärts transkribiert und in entsprechende DNA umgewandelt, die sich in die T-Zell-DNA integriert.
Dies ermöglicht die Synthese von CAR-Proteinen, Guide-RNAs und Cas9-Proteinen.
Die Guide-RNA bildet mit Cas9 einen Komplex, der das Zielgen auf der T-Zell-DNA spezifisch erkennt und an es bindet.
In der Zwischenzeit spaltet Cas9 die DNA, wodurch ein doppelsträngiger Bruch entsteht.
Dieser Bruch wird durch nicht-homologe Endverbindung, einen fehleranfälligen Reparaturmechanismus, repariert, der zu einer Modifikation des Zielgens führt.
Dabei entstehen genetisch veränderte T-Zellen mit chimären Antigenrezeptoren.
Behandeln Sie die Zellen mit Antibiotika, um die unmodifizierten T-Zellen zu eliminieren und die genetisch veränderten CAR-T-Zellen selektiv zu isolieren.
Um den Granulozyten-Makro
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