Ein Maus-Aorten-Interpositionsmodell zur Untersuchung der Alloimmun-induzierten Gefäßabstoßung

Bereiten Sie eine betäubte Spendermaus vor und bringen Sie sie in Rückenlage. Machen Sie einen Schnitt in der Mittellinie, um die Bauchhöhle freizulegen.

Externalisieren Sie den Darm, um die infrarenale Bauchaorta oder IAA unter den Nierenarterien zu lokalisieren, die sauerstoffreiches Blut transportieren.

Trennen Sie die IAA von der angrenzenden unteren Hohlvene, die sauerstoffarmes Blut führt.

Leinen Sie die kleinen Äste in der Nähe der IAA und klemmen Sie die IAA fest, um den Blutfluss zu behindern.

Schneiden Sie ein Segment der entsprechenden Länge neu und legen Sie es in Kochsalzlösung.

Wiederholen Sie den Vorgang mit einer Empfängermaus mit einem anderen genetischen Hintergrund.

Implantieren Sie die Spender-IAA in den Empfänger, passend zu seiner anatomischen Ausrichtung.

Führen Sie End-to-End-Anastomosen durch, indem Sie die Enden des Spendertransplantats mit den Empfängerenden vernähen.

Lösen Sie die Klammern und prüfen Sie, ob der Blutfluss normal und ohne Leckage ist. Führe den Darm wieder in die Bauchhöhle zurück. Als nächstes vernähen Sie die Inzisionsstelle.

Das Modell ist nun bereit, Immunantworten gegen das transplantierte IAA-Transplantat zu untersuchen.

Beginnen Sie damit, die Spendermaus in Rückenlage auf eine saubere, dünne Plexiglasplatte zu legen, die mit einem sterilen Tuch unter dem Operationsmikroskop bei einer 8- bis 30-fachen Vergrößerung umwickelt ist.

Nachdem Sie eine angemessene chirurgische Anästhesie durch Zehenkneifen bestätigt haben, verwenden Sie eine sterile Schere, um einen einzelnen Mittellinienschnitt vom Schambein bis zum Xiphoid-Prozess vorzunehmen. Verwenden Sie als Nächstes einen kleinen Retraktor, um die Bauchwände zu öffnen und die Bauchhöhle freizulegen. Verwenden Sie dann sterile Applikatoren mit Wattespitze, um den Darm vorsichtig nach links vom Tier zurückzuziehen. Decken Sie das Gewebe mit mit Kochsalzlösung angefeuchteter Gaze ab und bewegen Sie die Fortpflanzungsorgane nach unten, um die infrarenale Aorta und die untere Hohlvene oder IVC zu lokalisieren.

Verwenden Sie nun eine medizinische Pinzette Nummer 5, um die Aorta von der IVC an der linken Nierenarterie in der Nähe der Bifurkation zu trennen. Verwenden Sie dann 10-0 monofile Polyamid-Nähte, um die kleinen Äste in der Nähe der Aorta zu ligieren. Wenn die Spenderaorta und die IVC getrennt wurden, sättigen Sie das Gefäß mit Kochsalzlösung. Decken Sie den freiliegenden Hohlraum mit angefeuchteter Gaze ab und legen Sie den Spender an einem sterilen Ort beiseite.

Legen Sie nun die Empfängermaus unter das Mikroskop und trennen Sie die Empfängeraorta von der IVC, wie gerade gezeigt. Platzieren Sie dann zwei 4-Millimeter-Mikrogefäßklemmen proximal und distal des interessierenden Segments im Abstand von etwa 5 Millimetern. Führen Sie anschließend mit einer Mikroschere von Vannas-Tübingen eine einzelne horizontale Aortotomie durch und resezieren Sie nicht mehr als 0,5 Millimeter der Bauchaorta, um das Spender-Aortentransplantat aufzunehmen.

Bringen Sie den Spender zurück zum Mikroskop und durchschneiden Sie ein 3 bis 4 Millimeter großes Transplantatsegment, wie gerade gezeigt. Dann. Spülen Sie die exzidierte Aorta mit einer 25-Gauge-5/8-Nadel mit heparinisierter Kochsalzlösung, achten Sie darauf, dass die Nadelspitze nicht mit dem Gefäß in Berührung kommt, und legen Sie das Gefäß in einen Behälter mit heparinisierter Kochsalzlösung auf Eis.

Platzieren Sie das Spender-Aortentransplantat innerhalb von 30 Minuten nach der Exzision in der orthotopen Position des Empfängers, wobei die jeweilige anatomische Ausrichtung des Transplantats mit der des Empfängers übereinstimmt. Fassen Sie dann vorsichtig die Tunica externa des Gefäßes und drehen Sie sie mit der Pinzette Nummer 5 leicht um. Verwenden Sie nun die Pinzette, um eine Nadel, die an einer 10-0-Monofilament-Naht befestigt ist, durch die gesamte Dicke der Gefäßwand zu treiben, um das Spender-Aortentransplantat an dem resezierten Gefäß des Empfängers zu befestigen.

Für die Platzierung von durchgehenden Nähten positionieren Sie die Haltenähte bei 9 Uhr sowohl am oberen als auch am unteren Ende des Transplantats. Dann, beginnend am oberen Ende des Transplantats ab 3 Uhr, anastomosieren Sie die resezierten Enden mit zwei verlaufenden Nähten und befestigen Sie die Naht an der Bleinaht. Drehen Sie dann das Transplantat um und setzen Sie die laufende Naht bis zum dorsalen Teil des Gefäßes fort, wobei Sie auf die ursprüngliche Bleinaht treffen. Sichern Sie die Naht, ohne viel Druck auf das Gefäß auszuüben, und wiederholen Sie die Naht für die untere Anastomose.

Sobald die Anastomose abgeschlossen ist, lösen Sie die distale mikrovaskuläre Klemme, um einen retrograden Blutfluss durch das Gefäß zu ermöglichen. Wenn keine Blutung beobachtet wird, lösen Sie die proximale Klemme. Wenn keine Blutblockaden beobachtet werden, greifen Sie mit einer Pinzette vorsichtig an einem Ende der Haltenähte und wenden Sie das Gefäß leicht ab, um die Rückwand des Gefäßes zu inspizieren. Es sollte keine Kräuselung beobachtet werden. Wenn sowohl im Spender- als auch im Empfängergefäß ein kräftiges Pulsmuster beobachtet wird, verwenden Sie Applikatoren mit Wattespitze, um den Darm in die Bauchhöhle zurückzuführen.

Zum Schluss verwenden Sie einen Nadelhalter und eine Graefe-Pinzette, um die Bauchdecke mit 5-0 Polypropylen-Nähten und durchgehenden Nähten zu verschließen. Mit einem subkutikulären Verschluss verschließen Sie die Hautschicht mit den gleichen Nähten. Die motorische Funktion der hinteren Gliedmaßen kann beobachtet werden, um den Erfolg der Operation zu beurteilen.