JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologie
0 Ansichten • 2:16 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer anästhesierten Maus und verabreichen Sie einen lebend abgeschwächten BCG-Stamm von Mycobacterium bovis, der eine verminderte krankheitserregende Fähigkeit aufweist, durch die Nase der Maus.
Die injizierten Bakterien stimulieren eine Immunantwort im Lungengewebe und im nahe gelegenen Lymphknoten.
Dies führt zur Bildung von Effektor-T-Zellen und B-Zellen, die in den Blutkreislauf der Maus gelangen.
Die Effektor-B-Zellen produzieren Antikörper gegen Mykobakterien.
In der Zwischenzeit siedeln sich die Effektor-T-Zellen als residente Gedächtnis-T-Zellen oderT-RM-Zellen im Lungengewebe an und sorgen so für eine langfristige Immunität.
Um die Wirksamkeit der Immunisierung zu beurteilen, verabreichen Sie lebende, virulente Mykobakterien mit krankheitserregender Wirkung durch die Nase der Maus.
Dies löst die Aktivierung vonT-RM-Zellen im Lungengewebe aus.
AktivierteT-RM-Zellen setzen Zytokine frei und ziehen andere Immunzellen, einschließlich Effektor-B-Zellen, an.
Diese B-Zellen sezernieren Antikörper, die an Mykobakterien binden und deren Clearance durch Neutrophile verbessern, was auf eine erfolgreiche Immunisierung hinweist.
Für die intranasale Verabreichung beladen Sie eine Mikropipette mit 20 Mikrolitern der BCG-Suspension und platzieren Sie die anästhesierte Maus in Rückenlage in der Haube. Verabreichen Sie das Inokulum tropfenweise zwischen den beiden Nasenlöchern, bis sich das gesamte Volumen von 20 Mikrolitern abgelagert hat, wobei zwischen den Tropfen Zeit bleibt, damit die Maus die Suspension einatmen kann. Befüllen Sie dann die Mikropipette erneut mit weiteren 20 Mikrolitern Bakterien und wiederholen Sie die Verabreichung.
Bei intranasaler Provokation mit dem H37Rv-Mycobacterium tuberculosis-Stamm werden die Tiere zu einem geeigneten experimentellen Zeitpunkt nach der Impfung mit intranasaler Verabreichung von 40 Mikrolitern der H37Rv-Bakteriensuspension geimpft, wie gerade gezeigt.