Eine Technik zur Gen-Editierung in natürlichen Killerzellen mit CRISPR Cas9

Nehmen Sie eine Mischung aus einer CRISPR-RNA oder crRNA und einer trans-aktivierenden crRNA oder tracrRNA.

Erhitzen Sie die Mischung und lassen Sie sie abkühlen, um die Basenpaarung von tracrRNA mit crRNA zu einer Leit-RNA oder gRNA zu erleichtern.

Fügen Sie eine molekulare Schere hinzu, die Cas9-Enzyme genannt werden, die an die gRNA binden und Komplexe bilden.

Fügen Sie die Cas9-gRNA-Komplexe zu natürlichen Killer- oder NK-Zellen hinzu, die in einer Elektroporationslösung suspendiert sind.

Einführung einzelsträngiger DNA-Moleküle, die beim Transport von Cas9-gRNA-Komplexen helfen.

Übertragen Sie die Mischung in eine Küvette und führen Sie eine Elektroporation durch, wobei temporäre Poren in der Membran entstehen, durch die die Komplexe in die Zelle gelangen können.

Die gRNA bindet an die Zielstelle im Genom, wodurch Cas9 die DNA spalten kann.

Reparaturproteine binden an der Bruchstelle und verbinden sich mit der DNA, was häufig zu Einfüge- oder Deletionsfehlern bei Basenpaaren führt. Die daraus resultierende Modifikation stört das Zielgen und macht es funktionsunfähig.

Übertragen Sie die gentechnisch veränderten Zellen zur weiteren Analyse auf ein geeignetes Medium.

Am Tag der E