JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 2:58 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit bidirektionalen Plasmiden, die cDNA tragen, die für bestimmte virale essentielle Proteine eines kälteadaptierten Influenzastamms kodieren.
Einführung eines neuen Satzes bidirektionaler Plasmide, die Hämagglutinin und modifizierte Neuraminidase-cDNA aus einem anderen Influenzastamm enthalten.
Geben Sie ein Transfektionsreagenz in diese Mischung und inkubieren Sie, um einen Komplex mit den Plasmiden zu bilden.
Übertragen Sie diese Komplexe auf kultivierte humane epithelähnliche Zellen, um den Eintritt von Plasmiden in die Zelle zu ermöglichen.
Die bidirektionalen Plasmide mit zwei Promotoren in entgegengesetzter Ausrichtung ermöglichen die Herstellung von viralen Proteinen und ihrer entsprechenden RNA
.Inkubieren Sie die Zellen bei einer niedrigeren Temperatur.
Die viralen Proteine und die viralen RNAs assemblieren sich selbst zu kälteadaptierten rekombinanten Influenzaviren mit reduzierter Replikation unter wärmeren Bedingungen.
Overlay mit Sialinsäure-überexprimierenden MDCK-Zellen und modifizierten Trypsin-Enzymen, die die Anheftung und den Eintritt von Viren in Zellen ermöglichen.
Inkubieren Sie bei der gleichen Temperatur, um die Replikation und Produktion neuer
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