Ein dreidimensionales Co-Kultur-Modell der Infiltration von T-Zellen in Tumor-Sphäroiden

Beginnen Sie mit einer Kulturplatte mit einem Agarose-Abguss. Der Abguss besteht aus einer Säkammer mit mehreren Mikrovertiefungen.

Jede Mikrovertiefung enthält ein Tumorsphäroid in einem Nährmedium. Die Sphäroide sind dreidimensionale Aggregate von Tumorzellen.

Entfernen Sie zunächst das Medium, das den Agarose-Abguss umgibt. Entfernen Sie dann das Medium innerhalb des Gusses aus einer Ecke der Säkammer, um den Verlust von Sphäroiden zu vermeiden.

Führen Sie eine Suspension tumorspezifischer T-Zellen tropfenweise in die Aussaatkammer ein, damit sich die Zellen in den Mikrovertiefungen mit den Sphäroiden ansiedeln können.

Als nächstes fügen Sie ein Kulturmedium um den Agaroseguss hinzu und inkubieren die Platte unter physiologischen Bedingungen, um eine Co-Kultur zu entwickeln.

Während der Inkubation umgeben die T-Zellen das Sphäroid. Eine Untergruppe von T-Zellen infiltriert das Sphäroid, während andere in der Peripherie verbleiben, wodurch ein dreidimensionales Co-Kultur-Modell entsteht.

Um eine T-Zell-Co-Kultur einzurichten, resuspendieren Sie die entsprechende Anzahl von T-Zellen in 190 Mikrolitern eines geeigneten T-Zell-Kulturmediums pro Vertiefung und kippen Sie die 12-Well-