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Beginnen Sie mit einer gefesselten Maus, der Interleukin-10 fehlt, ein entzündungshemmendes Zytokin, das zu einer Dickdarmentzündung führt.
Nehmen Sie eine Spritze, die mit einer Stuhlsuspension gefüllt ist, die reich an verschiedenen Darmmikroben ist, von einer gesunden Maus.
Befestigen Sie anschließend einen oralen Schlauch an der Spritze.
Führen Sie diesen Schlauch in den Mund ein und führen Sie ihn nach unten zum Magen der Maus.
Verabreichen Sie nun die Stuhlsuspension direkt in den Magen, so dass sie allmählich den Dickdarm erreichen kann.
Sobald sie sich im Dickdarm befinden, vermehren und besiedeln sich die fäkalen Mikroben und etablieren die Darmmikroben wieder.
Die besiedelten Mikroben setzen dann verschiedene Sekundärmetaboliten frei.
Diese Metaboliten helfen bei der Muzinproduktion, die das Dickdarmepithel repariert und die Darmintegrität wiederherstellt.
Im Dickdarmepithel interagieren die fäkalen Mikroben und ihre Metaboliten mit Immunzellen.
Diese Wechselwirkung bewirkt, dass die Immunzellen entzündungshemmende Zytokine freisetzen, was zu einer Verringerung der Dickdarmentzündung bei der Interleukin-10-defizienten Maus führt.
Bereiten Sie eine sterile Lösung vor, indem Sie 10% ige Glycerinlösung zu normaler Kochsalzlösung hinzufügen. Geben Sie 10 Milliliter dieser Lösung für jedes Gramm Kotpellets in das konische Röhrchen. Homogenisieren Sie diese Mischung dreimal 30 Sekunden lang bei niedriger Geschwindigkeit mit einem Tischhomogenisator in einem Abzug, um den Kot wieder aufzuwirbeln. Filtern Sie die Stuhlsuspension durch zwei Schichten steriler Baumwollgaze. Lagern Sie das Filtrat vorübergehend bis zu sechs Stunden im Kühlschrank oder verpacken Sie es in sterile Kryofläschchen und lagern Sie es in einem Gefrierschrank mit minus 80 Grad.
Reinigen Sie den Homogenisator oder Mixer gründlich nach einem Standardverfahren. Tauen Sie die gefrorene Stuhlsuspension auf Eis auf, wenn Sie gefrorene Proben verwenden. Mischen Sie die aufgetaute Stuhlsuspension durch Vortexen. Übertragen Sie die frische oder aufgetaute Stuhlsuspension in 1-Milliliter-Spritzen. Wiegen Sie die Mäuse und wählen Sie die richtige Größe der Sondennadel und das maximale Dosierungsvolumen.
Testen Sie die Sondennadel, indem Sie die Länge von der Nasenspitze der Maus bis zur Unterseite des Brustbeins messen. Füllen Sie die Spritze mit 10 % Glycerin in Kochsalzlösung oder Stuhlsuspension und entfernen Sie die Luftblasen in der Spritze und der Nadel. Stellen Sie einen Mäusekäfig in die Biosicherheitswerkstatt, entfernen Sie die Kunststoffkäfigabdeckung und lassen Sie das Metallgestell an Ort und Stelle.
Öffnen Sie das Metallgestell mit einer Hand. Fassen Sie eine Maus am Schwanz und legen Sie sie auf das Metallgestell. Halten Sie die Maus mit einer Hand am Schwanz fest und halten Sie das Tier mit Daumen und Mittelfinger der anderen Hand fest, indem Sie die Haut über die Schultern greifen. Strecken Sie den Kopf des Tieres vorsichtig nach hinten und halten Sie den Kopf mit einer Hand fest. Platzieren Sie die Sondennadel auf der Zunge im Mund.
Schieben Sie sich sanft entlang des oberen Gaumens, bis die Nadel die Speiseröhre erreicht. Führen Sie die Nadel in einer Bewegung sanft durch. Sobald die Nadel richtig platziert und überprüft ist, verabreichen Sie das Material langsam, indem Sie die an der Nadel befestigte Spritze drücken. Ziehen Sie nach der Dosierung die Nadel vorsichtig heraus. Markieren Sie die Maus und bringen Sie sie in ihren Heimatkäfig zurück. Überwachen Sie das Tier 5 bis 10 Minuten lang, indem Sie nach Anzeichen von Atemnot oder Stress suchen. Überwachen Sie die Mäuse erneut zwischen 12 und 24 Stunden nach der fäkalen Mikrobiota-Transplantation.