JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 2:55 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multiwell-Platte mit natürlichen Killerzellen (NK) und Krebszellen. Kontrollbrunnen enthalten nur Krebszellen.
Zentrifuge, um den Zellkontakt zu erleichtern.
ausbrüten. Aktivierende Rezeptoren auf NK-Zellen binden an Oberflächenliganden von Krebszellen und veranlassen NK-Zellen, Granulate freizusetzen, die zytotoxische Moleküle enthalten.
Diese Moleküle bilden die Membranporen von Krebszellen und induzieren Apoptose, wodurch intrazelluläre Inhalte, einschließlich Laktatdehydrogenase oder LDH, freigesetzt werden.
Fügen Sie ein Detergens hinzu, um die Krebszellen in Kontrollvertiefungen zu lysieren, um eine maximale LDH-Freisetzung zu erzielen.
Zentrifugieren Sie und überführen Sie einen Teil der LDH-haltigen Überstände auf eine Assay-Platte.
Fügen Sie das Assay-Reagenz hinzu und inkubieren Sie.
LDH wandelt Laktat in Pyruvat um und reduziert NAD+. Diaphorase verwendet NADH, um Tetrazoliumsalz zu reduzieren und ein rot gefärbtes Formazanprodukt zu bilden.
Fügen Sie eine saure Lösung hinzu, um die enzymatische Reaktion zu stoppen.
Verwenden Sie einen Mikroplatten-Reader, um die Formazan-Absorption in den Vertiefungen zu messen.
Die Formazan-Intensität ist proportional z
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos