Eine Technik zur Erzeugung antigenspezifischer CAR-T-Zellen
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:32 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Mikrotiterplatte, die mit rekombinanten Fibronektinfragmenten beschichtet ist, und fügen Sie aktivierte murine CD8-positive T-Zellen hinzu.
Einführung retroviraler Vektoren, die eine transgene RNA enthalten, die für einen chimären Antigenrezeptor oder CAR kodiert.
Decken Sie die Platte ab und verschließen Sie sie in einem Beutel, um eine Kontamination zu vermeiden. Zentrifugieren Sie die Platte mit niedriger Geschwindigkeit, um die Interaktion zwischen Virus und Zellen zu erleichtern.
Fibronektin bindet an das Virus und die Zelle und kolokalisiert sie, um den virusvermittelten Gentransfer zu verbessern.
Entfernen Sie nach der Zentrifugation den versiegelten Beutel und inkubieren Sie die Platte unter physiologischen Bedingungen.
Die Hülle des viralen Vektors verschmilzt mit der Zellmembran und setzt die virale RNA und die Enzyme frei.
Die viralen Enzyme transkribieren die freigesetzte RNA rückwärts und integrieren die resultierende DNA in das Wirtsgenom, wodurch die Zellen oberflächengebundene CARs exprimieren können.
Das CAR besteht aus einer Antigen-Bindungsdomäne, die spezifisch für das Zielantigen ist, und Signaldomänen für die T-Zell-Aktivierung.
Die antigenspez
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