JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:20 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer Knochenmarkstammzellkultur.
Führen Sie den Trypsin-EDTA-Puffer ein, um die Zellen abzulösen und die Zellklumpen aufzubrechen, wodurch eine einzellige Suspension entsteht.
Zentrifuge, dann den Überstand entfernen. Suspendieren Sie das Pellet mit einem frischen Medium.
Übertragen Sie die Suspension in eine Spritze und verbinden Sie sie mit einer Membranfiltereinheit.
Drücken Sie den Kolben und entsorgen Sie das filtrathaltige Medium.
Nehmen Sie den Filter ab. Füllen Sie die Spritze mit einem frischen Medium. Schließen Sie den Filter wieder an und drücken Sie schnell auf den Kolben.
Durch den Druck der Flüssigkeit wird die Zelle in Richtung der Filterporen gedrückt.
Dabei entsteht ein kugelförmiges Plasmamembran-Vesikel, kurz PMV.
Diese Vesikel enthalten Zellbestandteile und Organellen, die von der Membran umgeben sind.
Untersuchen Sie das Filtrat unter einem inversen Phasenkontrastmikroskop, um durchscheinende kugelförmige Vesikel zu beobachten.
Die Abmessungen der Vesikel stimmen mit der Porengröße der Filtermembran überein, was die Bildung von PMVs bestätigt.
Um die PMVs zu erzeugen, wurden zunächst Maus-PMSCs in vollständigem DMEM-Kulturmedium in einer Verti
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