JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:21 Min. • July 8th, 2025
Nehmen wir einen murinen Melanomtumor, der tumorassoziierte Neutrophile (TANs) umfasst.
TANs weisen eine erhöhte Aktivität des Enzyms Nicotinamid-Phosphoribosyltransferase (NAMPT) auf, das die Angiogenese, die Proliferation von Blutgefäßen in Tumoren und das Tumorwachstum stimuliert.
Zerkleinern Sie das Gewebe und fügen Sie Enzyme hinzu, um die Gewebematrix abzubauen und die Zellen zu lockern.
Filtern Sie die Suspension durch ein Sieb und zentrifugieren Sie, um die Zellen zu pelletieren.
Fügen Sie einen Lysepuffer hinzu, um die roten Blutkörperchen zu lysieren, zentrifugieren Sie dann und verwerfen Sie den Überstand mit den Zelltrümmern.
Einführung von Antikörpern zur Blockierung zellulärer Fc-Rezeptoren, wodurch unspezifische Immunfärbung vermieden wird.
Einführung eines Fluorophor-markierten Antikörpercocktails, der spezifisch für Oberflächenmarker auf TANs ist, und eines Farbstoffs zur Unterscheidung toter Zellen.
Isolieren Sie mit FACS die mit Fluorophoren markierten lebensfähigen TANs und übertragen Sie sie auf eine Mikroplatte.
Fügen Sie ausgewählten Wells einen Inhibitor hinzu, der die NAMPT-Aktivität blockiert, und inkubieren Sie.
Verwenden Sie die Zellen, um ihre Angiogene
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos