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Immunologie
0 Aufrufe • 3:12 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer Suspension von Mycobacterium bovis BCG, die mit einem nichtionischen Tensid behandelt wurde, um bakterielle Verklumpungen zu verhindern.
Als nächstes fügen Sie ein Biotinylierungsreagenz hinzu und inkubieren.
Dieses Biotinylierungsreagenz, ein Komplex aus Biotin, der mit einem funktionellen Linker komplexiert ist, erleichtert die Bindung von Biotinmolekülen an bakterielle Oberflächenproteine und die Markierung von Bakterien.
Nach der Inkubation die mit Biotin markierte Bakteriensuspension zentrifugieren, um das nicht umgesetzte Biotinylierungsreagenz zu entfernen.
Resuspendieren Sie die Bakterien in einem Puffer. Es wird eine Lösung des Avidin-Fusionsproteins hinzugefügt, eines rekombinanten Proteins, das eine Zielantigendomäne umfasst, die mit monomerem Avidin fusioniert ist.
Während der Inkubation bindet Avidin an Biotin und erleichtert so die bakterielle Oberflächenmodifikation mit Zielantigenen.
Die Suspension wird zentrifugiert, um ungebundene Fusionsproteine zu entfernen.
Resuspendieren Sie die antigenbeschichteten Bakterien in einem Puffer, der ein nichtionisches Tensid enthält. Die Antigenbeschichtung auf den Bakterien kann ihre Eigenschaft verbessern
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