JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 6:08 Min. • July 8th, 2025
Kulturinduzierte pluripotente Stammzellen auf einer Feeder-Schicht aus Stromazellen auf einer Gelatinematrix.
Die Feeder-Schicht ahmt die natürliche extrazelluläre Umgebung nach und leitet die Differenzierung der Stammzellen in kuppelförmige Organoide, die hämatopoetische Vorläuferzellen enthalten.
Fügen Sie Enzyme hinzu, um die co-kultivierten Zellen zu dissoziieren.
Übertragen Sie die Zellen in eine frische, mit Gelatine überzogene Schale, um die Adhäsion der Stromazellen zu gewährleisten.
Sammeln Sie die nicht adhärenten hämatopoetischen Vorläuferzellen in einem Differenzierungsmedium.
Kulturieren Sie sie auf einer frischen Feeder-Schicht, um die Differenzierung der Vorläuferzellen in doppelt positive T-Zellen mit CD4- und CD8-Rezeptoren und doppelt-negative T-Zellen ohne beide Rezeptoren zu fördern.
Übertragen Sie die Zellen in ein Röhrchen. Inkubieren Sie sie mit magnetischen Kügelchen mit CD4-spezifischen Antikörpern, die die doppelt-positiven T-Zellen selektiv markieren.
Verwenden Sie einen Magnetabscheider, um die doppelt positiven Zellen zu isolieren und auf einer frischen Feeder-Schicht zu kultivieren.
Ergänzen Sie mit einer Mischung aus Zytokinen und Antikörpern, um die
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