Eine Technik zur Kultivierung von Hippocampus-Neuronen von Mäusen

Nehmen Sie ein geerntetes Mausjunges Hippocampus in einem Puffer.

Schneide den Hippocampus in kleinere Fragmente und übertrage sie in eine konische Röhre.

Waschen Sie das Tuch mit Puffer. Sobald sich die Fragmente abgesetzt haben, entfernen Sie den Puffer. Fügen Sie nun frischen Puffer und Trypsin hinzu.

Während der Inkubation verdaut Trypsin, ein proteolytisches Enzym, die extrazelluläre Matrix des Gewebes und lockert so die Neuronen des Hippocampus.

Waschen Sie das verdaute Gewebe mit Puffer.

Sobald sich die Fragmente abgesetzt haben, entfernen Sie den Puffer. Fügen Sie frischen Puffer hinzu und pipettieren Sie das Gewebe wiederholt, um es mechanisch zu dissoziieren und eine einzellige Suspension zu erhalten.

Sobald sich das unverdaute Gewebe abgesetzt hat, wird die Zellsuspension auf Poly-L-Lysin-beschichtete Deckgläser mit Wachsträgern in einer Kulturplatte mit Medium übertragen.

Die Zellen heften sich durch elektrostatische Wechselwirkungen an die Poly-L-Lysin-beschichteten Oberflächen.

Legen Sie nun die an Neuronen haftenden Deckgläser mit der Vorderseite nach unten in eine Schale, die kortikale gliale oder nicht-neuronale Zellen in serumfreien Medien enthält.

In Kultur verhi