JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:51 Min. • July 8th, 2025
Nehmen wir das Gehirn eines transgenen Mäusewelpen.
Entfernen Sie das Kleinhirn und präparieren Sie das Gehirn. Trennen Sie das Kortiko-Hippocampus-Gewebe, das fluoreszierende Protein-exprimierende exzitatorische Neuronen enthält.
Übertragen Sie das Gewebe auf eine Kulturplatte mit Puffer.
Das Gewebe zerkleinern und in ein Röhrchen mit Papain geben.
Papain verdaut die extrazelluläre Matrix des Gewebes und lockert die Zellen, einschließlich der Neuronen.
Übertragen Sie das verdaute Gewebe in ein Röhrchen mit BSA-Proteinen, um die enzymatische Aktivität zu stoppen und Zellschäden zu verhindern.
Dissoziieren Sie das Gewebe mechanisch und setzen Sie Zellen frei.
Zentrifugieren und den Überstand, der Rückstände und Enzyme enthält, entfernen.
Resuspendieren Sie die Zellen in neuronalen Medien mit niedriger Fluoreszenz und filtrieren Sie durch ein Zellsieb, wobei Zellaggregate entfernt werden.
Führen Sie eine fluoreszenzaktivierte Zellsortierung durch, um die fluoreszierenden Neuronen zu identifizieren und zu sortieren.
Übertragen Sie die sortierten Neuronen in ein Mikrozentrifugenröhrchen und eine Zentrifuge. Neuronen in neuronalen Medien resuspendieren.
Seed-Neuronen auf Poly-L-Lysin-be
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